Blasticidin S殺稻瘟菌素S（滅瘟素）是一種多肽核苷類抗生素。它首先從S.griseochromogenes中分離出來(lái)。利用衍射儀數(shù)據(jù)確定了五水合物形式的結(jié)構(gòu)，與抗生素阿米西汀相似，親水和疏水基團(tuán)位于分子的兩側(cè)。此后利用全合成法創(chuàng)造了它。在研究中，Blasticidin S用于篩選攜帶有bsr或BSD耐受基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。殺稻瘟菌素具有快速而強(qiáng)效的作用模式，很低的抗生素濃度便能導(dǎo)致細(xì)胞迅速死亡。

      目前已經(jīng)克隆和測(cè)序的殺稻瘟菌素耐受基因有3種，一種是分離自產(chǎn)生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基轉(zhuǎn)移酶基因bls，另外兩種是脫氨酶基因，包括從Bacillus cereus 中分離的bsr和從Aspergillus terreus 中分離的BSD 基因。Bsr和 BSD 基因是最常用的篩選標(biāo)志，用于哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，也可用于E.Coli。

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      更多，推薦參考資訊：

       1）Escherichia coli應(yīng)用濃度

      Ecoli對(duì)Blasticidin S的敏感性稍差，但是轉(zhuǎn)化子對(duì)Blasticidin S具有耐受性，可以用低鹽LB培養(yǎng)基（pH 8）進(jìn)行篩選，濃度范圍為50-100 ug/mlBlasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。

       2）哺乳動(dòng)物細(xì)胞，應(yīng)用濃度

      哺乳動(dòng)物細(xì)胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 ug/ml（通常為10 ug/ml）。初次實(shí)驗(yàn)建議通過(guò)滅殺曲線來(lái)確定最佳使用濃度。一些哺乳動(dòng)物細(xì)胞的建議工作濃度：

      操作步驟（哺乳動(dòng)物穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選）

      1）轉(zhuǎn)染后48h，用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞傳代（注：細(xì)胞處于活躍分裂期時(shí)抗生素工作最好。細(xì)胞密度太高，抗生素效率降低。細(xì)胞分盤時(shí)覆蓋率最好不超過(guò)25%）。

      2）每3-4天去除培養(yǎng)基，加入含抗生素的新鮮培養(yǎng)基。

      3）7天后檢測(cè)細(xì)胞集落形成。根據(jù)宿主細(xì)胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要增加一周或更久。      

      4）轉(zhuǎn)移5-10個(gè)耐受克隆到35 mm細(xì)胞盤中，加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天。隨后用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。

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