血液含有細胞和無細胞游離核酸。當細胞死亡時，細胞內(nèi)的物質會被釋放出來，包括 DNA和RNA。血液中不受保護的核酸被核酸酶消化。與蛋白質結合和包含在外泌體內(nèi)的DNA和RNA被保護不被降解——被稱為無細胞循環(huán)DNA/RNA（cf-DNA/cf-RNA）。

（1）在血漿中發(fā)現(xiàn)cf-DNA/cf-RNA；

（2）表現(xiàn)為正常的cf-DNA、循環(huán)腫瘤 DNA（ct-DNA）或cf-RNA；

（3）癌癥檢測的重要生物標志物包括ct-DNA和cf-RNA；

（4）通常以低豐度存在：1-100 pg/uL。

Norgen全血采集管

市面上血樣通常收集在含EDTA（抗凝劑）等的收集管中，但這需要在裝運前立即處理或冷凍。

痛點：

（1）昂貴的干冰運輸；

（2）因延誤造成珍貴樣品損失；

（3）試驗樣本收集的地域限制。

Norgen 的防腐劑（保護劑）允許在室溫下將DNA和RNA保存在一管中，以便儲存和運輸——長達30天。艾美捷科技作為專業(yè)的生命科學領域解決方案供應商，為您推薦獨家代理Norgen Biotek品牌的全血采集管：cf-DNA/cf-RNA Preservative Tubes (#63950/Dx63950)。

優(yōu)勢：

（1）在室溫下將cf-DNA和cf-RNA保存30天；

（2）在室溫下保存 CTCs 14 天；

（3）無甲醛 = 無DNA交聯(lián)；

（4）防止血細胞凋亡和基因組DNA片段化；（*防止血漿被基因組DNA污染）

（5）防止溶血和血漿污染；（*防止溶血=運輸后無血漿損失）

（6）抽真空以在10mL PET管中抽取8.4mL血液；

（7）多個關鍵應用：診斷（血液生物標志物）、SNP 發(fā)現(xiàn)和基因分型、NIPT（無創(chuàng)產(chǎn)前檢測）、表觀遺傳研究、藥物基因組學研究、液體活檢（癌癥檢測和監(jiān)測）和下一代測序（基因組和轉錄組）。

（8）相比于其他競爭對手：

痛點：

① 其他競爭對手保存所有核酸、外泌體和CTCs需要多個管；而Norgen可以保存所有的核酸，外泌體和CTCs；

② 用其他管的保存時間更短；而Norgen的全血收集管在室溫下將cf-DNA和cf-RNA保存30天；

③ 用其他管在高溫（最高37℃）保存時間短；而Norgen的全血收集管在37°C下保存長達8天。

血漿/血清RNA和DNA純化

目前DNA和RNA的常見的純化方法是使用苯酚 : 氯仿和硅膠色譜柱。

（1）苯酚 : 氯仿——捕獲總RNA，價格便宜，但苯酚是抑制劑，需要進一步清理；苯酚和氯仿是有害的等；

（2）硅膠色譜柱——不是RNA的最佳選擇（偏向于結合較大的片段），也可能需要使用載體RNA等；

痛點：

① 酚類物質是抑制劑，在下游應用前需要進一步清除；

② 苯酚和氯仿是有害的；

③ RNA載體不適合NGS（例如RNA-seq）；

④ 其它方法會使得RNA多樣性缺失。

Norgen Biotek品牌專利性的純化方法和技術：碳化硅色譜柱（Silicon Carbide）。

優(yōu)勢如下：

（1）無大小偏差的RNA分離；

（2）捕獲真正的總 RNA，包括小RNA（加上microRNA和siRNA），無需 RNA 載體或苯酚；

（3）提供2種形式：

① 柱提法（Column）

1.a) 用于較小的樣品上樣量；

2.b) 樣品通過預先裝有樹脂的色譜柱；

② 漿液形式（Slurry）

1.a) 用于更大的樣品上樣量；

2.b) 樣品與懸浮在緩沖液中的樹脂混合；

（4）兩種形式均可捕獲血漿中的所有cf-DNA和cf-RNA（宿主，病毒等）。

可以手動純化血漿/血清中的cf-DNA和cf-RNA，也可以使用自動化試劑盒與各種開放式自動化機器/液體處理設備兼容。可用于在一次洗脫中純化僅cf-DNA，僅cf-RNA，cf-DNA和cf-RNA，或在單獨洗脫中同時純化cf-DNA和cf-RNA。

舉例如下：

血漿/血清RNA純化的主要亮點：

（1）分離所有大小的循環(huán)和外泌體RNA，包括microRNA；

（2）不含有害苯酚或氯仿；

（3）不使用載體RNA；

（4）結合和洗脫所有RNA，無論大小或GC含量如何，無偏差；

（5）在35-40分鐘內(nèi)純化高質量RNA；

（6）純化的RNA不含抑制劑，適用于各種下游應用，包括二代測序（如small RNA-seq）。

Tips：低豐度RNA的定量

（1）無法使用NanoDrop進行定量。需要其它方法。

（2）請參閱Application Note 47 - Revised Guidelines for RNA Quality Assessment for Diverse Biological Sample Input.

作為一家具有高端的技術實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)，總部位于武漢光谷高新技術開發(fā)區(qū)，服務面向全國。艾美捷科技是集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品、整合的解決方案，及優(yōu)質的物流服務。為了更好的服務客戶，公司組建了一支經(jīng)驗豐富的研發(fā)團隊-艾美捷生物技術中心，進入研發(fā)生產(chǎn)階段，將更優(yōu)質的產(chǎn)品推薦給國內(nèi)生物領域的同仁們!

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