DNA是攜帶生物體遺傳信息的重要分子，它的完整性對細胞存活至關(guān)重要。然而，在生命活動中，DNA時刻遭受著內(nèi)源性（氧化自由基、復制叉崩塌等）或外源性（電離輻射、烷化劑等）刺激，DNA損傷不可避免。

       檢測DNA損傷的方法有很多，根據(jù)其原理大致可以分為3類： 基于損傷DNA理化性質(zhì)的改變檢測DNA損傷、基于分子雜交檢測DNA損傷以及基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測DNA損傷。前兩種方法是基于熒光標記直接觀測DNA的損傷情況，而基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測DNA損傷是通過標記物的檢測間接反映DNA的損傷程度。

       ※ 基于DNA損傷后形成產(chǎn)物進行檢測

       DNA損傷過程中可形成某些特定的損傷產(chǎn)物，可通過檢測損傷產(chǎn)物（磷酸化H2AX、8-OHdG等）來評估DNA損傷。也可標記損傷DNA，如末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的脫氧尿苷三磷酸標記（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL），通過標記物的檢測間接反映DNA的損傷程度。

       1.雙鏈斷裂標志物磷酸化H2AX檢測法

       H2AX是組蛋白H2A家族成員之一，包含一個進化保守區(qū)域SQ位于真核細胞的C末端，分子量為14KD，139位有個絲氨酸殘基，在細胞發(fā)生DNA雙鏈斷裂后的數(shù)分鐘內(nèi)，將會被ATM,ATR和PRKDC磷酸化，形成γH2AX，進而迅速招募DNA修復蛋白和凋亡蛋白到損傷部位，每個雙鏈的斷裂區(qū)會有成百上千的γ-H2AX，然后在1h左右數(shù)量和密度達到峰值。由于γH2AX的出現(xiàn)與DNA雙鏈斷裂緊密關(guān)聯(lián)，是目前國內(nèi)外研究細胞DNA雙鏈斷裂應激反應的熱點之一，同時也可以作為DNA雙鏈斷裂的標志物。

       由于與DNA雙鏈斷裂緊密相關(guān)，γH2AX可以作為雙鏈修復的標志物，艾美捷可為您提供完備的H2AX檢測產(chǎn)品：

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       2.氧化損傷標志物8-OHdG檢測法

       DNA氧化損傷產(chǎn)物中，作為DNA中脫氧鳥苷（dG）的羥基加合物，8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）因其形成量大，影響因素少，已被公認為最能反映體內(nèi)DNA氧化損傷程度的生物標志物。

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       3.DNA斷片標記法

       原位末端標記法（TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）是一種檢測凋亡細胞DNA鏈斷裂片段的方法。細胞凋亡發(fā)生時，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將DNA降解成片段，在脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶的作用下，底物dUTP 或BrDU(無或有熒光標記)可連接到DNA斷片的3-OH末端，采用熒光顯微鏡或流式細胞儀對標記物進行分析，實現(xiàn)在單細胞水平檢測凋亡細胞的DNA碎片。

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