【前情回顧】慢病毒包裝Protocol大放送

慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，基因組為雙鏈RNA。慢病毒載體可以將外源基因有效整合到宿主染色體，從而達(dá)到持久性表達(dá)，區(qū)別于一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒具有更廣的宿主范圍，對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力，對(duì)于較難轉(zhuǎn)染 的多種細(xì)胞如神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞、 非分化細(xì)胞等，均能極大提高目的基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，具有廣闊的應(yīng)用前景。前面我們給大家詳細(xì)的介紹過(guò)慢病毒包裝的過(guò)程，今天我們?cè)俳o大家細(xì)說(shuō)一下在慢病毒包裝、感染過(guò)程中不容忽視的慢病毒效力指標(biāo)——慢病毒滴度。

那么什么是病毒滴度呢？就像重組蛋白合成以后需要檢測(cè)純度一樣，病毒包裝后的效力如何，如何定量，也是必須要檢測(cè)的，專業(yè)術(shù)語(yǔ)稱為：病毒滴度的測(cè)定。慢病毒滴度是用于評(píng)估轉(zhuǎn)導(dǎo)一定數(shù)量靶細(xì)胞所需要的病毒數(shù)量，即每升溶液中含有的病毒數(shù)量。轉(zhuǎn)導(dǎo)單位(TU)即能夠感染并整合到細(xì)胞內(nèi)的病毒載體基因組。常規(guī)生產(chǎn)的病毒的滴度在2x10E8TU/ml之間。所以，在慢病毒研究過(guò)程中，有效實(shí)現(xiàn)病毒滴度的檢測(cè)顯得尤為重要。下面我們就來(lái)聊下幾種常見(jiàn)的慢病毒載體滴度的檢測(cè)方法。

1.ELISA法檢測(cè)病毒滴度

p24蛋白是慢病毒外殼中含量最大的標(biāo)志性蛋白。p24 ELISA法測(cè)量病毒上清液中p24衣殼蛋白的量，然后將p24的含量水平與病毒滴度關(guān)聯(lián)起來(lái)。Cell Biolabs提供的基于慢病毒p24蛋白的ELISA分析分兩種，一種稱為傳統(tǒng)的p24蛋白ELISA檢測(cè)（Quantitation Kit (Traditional HIV p24 ELISA)），能檢測(cè)所有p24蛋白，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒滴度的定量，可檢測(cè)1 ng/mL HIV p24蛋白，最后分光光度計(jì)讀取數(shù)據(jù)。但是由于這種傳統(tǒng)的p24 ELISA 法能檢測(cè)所有p24蛋白，所以病毒滴度會(huì)偏高。同時(shí)Cell Biolabs提供的新的Lentivirus Titer Kit(Lentivirus-Associated HIV p24)能分離出包裝細(xì)胞產(chǎn)生的游離p24蛋白，只檢測(cè)病毒顆粒表面的p24，因此實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更真實(shí)準(zhǔn)確，可檢測(cè)1 ng /mL HIV p24蛋白，最后分光光度計(jì)讀取數(shù)據(jù)。

傳統(tǒng)的p24 ELISA可檢測(cè)到293細(xì)胞在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染過(guò)程中產(chǎn)生的病毒相關(guān)p24和游離p24，而游離的p24可以占上清液中p24總量的很大一部分。因此，傳統(tǒng)的p24 ELISA通常會(huì)高估存在的慢病毒的數(shù)量。新的QuickTiter慢病毒滴度試劑盒（與慢病毒相關(guān)的HIV p24）可最大程度地減少此問(wèn)題。一項(xiàng)專有技術(shù)可在運(yùn)行測(cè)定的ELISA部分之前，將慢病毒與溶液中的游離p24分離。

傳統(tǒng)的p24 ELISA法

新的p24 ELISA法

2.Real-time PCR法檢測(cè)病毒滴度

利用基于SYBRGreen的熒光定量PCR方法，PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，通過(guò)Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析，根據(jù)相應(yīng)公式計(jì)算慢病毒滴度。

GeneCopoeia提供的Lenti-Pac?慢病毒滴度檢測(cè)試劑盒系列產(chǎn)品為簡(jiǎn)便、快速檢測(cè)慢病毒顆粒的滴度而設(shè)計(jì)。試劑盒包含從RNA抽提到qRT- PCR檢測(cè)過(guò)程的全套試劑，樣品經(jīng)過(guò)RNA抽提、DNase消化、反轉(zhuǎn)錄、qRT-PCR步驟即可確定慢病毒滴度。

Lenti-Pac?慢病毒滴度檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

能夠判斷慢病毒是否包裝成功；

準(zhǔn)確測(cè)定病毒拷貝數(shù)，以確保細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)的效率；

提供滴度檢測(cè)過(guò)程從病毒的RNA提取到qPCR檢測(cè)所需要的試劑。

慢病毒滴度檢測(cè)：ELISA法&qPCR法，雙管齊下，想怎么測(cè)就怎么測(cè)！

作為一家具有高端的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)，總部位于武漢光谷高新技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)，服務(wù)面向全國(guó)。艾美捷科技是集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品、整合的解決方案，及優(yōu)質(zhì)的物流服務(wù)。為了更好的服務(wù)客戶，公司組建了一支經(jīng)驗(yàn)豐富的研發(fā)團(tuán)隊(duì)-艾美捷生物技術(shù)中心，進(jìn)入研發(fā)生產(chǎn)階段，將更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品推薦給國(guó)內(nèi)生物領(lǐng)域的同仁們!

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