酶聯(lián)免疫斑點實驗（enzyme linked immunospot assay.ELISpot）是一種在96孔板內(nèi)的一百萬個細胞中實現(xiàn)對單個分泌細胞進行定量檢測的新型的免疫酶技術(shù)。靈敏度高，易操作，成本相對流式細胞術(shù)較低，已被廣泛應(yīng)用于癌癥研究，疾病探索以及疫苗研發(fā)等領(lǐng)域。

ELISpot原理：將細胞置于包被有特異性抗體的96孔板中培養(yǎng)，在有刺激的條件下，細胞分泌的細胞因子或免疫球蛋白會被包被抗體捕獲。移除細胞后，被捕獲的細胞因子可進一步使用生物素標(biāo)記的二抗來標(biāo)識，其后再與酶標(biāo)記的親和素作用，并加入底物使其呈色，有反應(yīng)作用的細胞會留下直徑大小不等的染色斑點。

具體步驟：

1.加入細胞到含有（或不含）刺激物中培養(yǎng)；

2.陽性細胞開始分泌細胞因子，細胞因子就近被包被抗體捕獲；

3.移出細胞，清洗板子，加入生物素標(biāo)記的檢測抗體，形成“抗體-抗原-抗體”夾心結(jié)構(gòu)；

4.為了觀察膜上斑點的形成，加入酶標(biāo)記的親和素；

5.加入顯色底物，在酶的催化分解下，生成不可溶的色素，就近沉淀在局部的膜上形成斑點；

6.斑點計數(shù)（可人工計數(shù)，也可用自動讀板儀計數(shù)），數(shù)據(jù)處理，結(jié)果分析。

B細胞ELISpot

B細胞ELISpot是對分泌的免疫球蛋白進行直接檢測的有力工具。可用來直接計數(shù)抗體分泌細胞（ASCs）和長期記憶B細胞。相對于常用的細胞流式而言，B細胞ELISpot能在十萬個細胞中實現(xiàn)對單個抗原特異性B細胞進行定量檢測，因而具有極高的靈敏度。B細胞ELISpot的主要應(yīng)用于檢測B細胞對感染和疫苗接種引起的反應(yīng)。

B細胞ELISpot檢測需要捕獲和檢測抗體或抗原，采用夾心法對抗體分泌細胞ASCs進行計數(shù)。總Ig B細胞ELISpot（A）捕獲和檢測所有的ASC抗體，會以兩種方式同時進行。一種是反向ELISpot（B），利用標(biāo)記抗原進行檢測；另外一種是傳統(tǒng)的ELISpot (C)：將抗原包被在孔板上，利用標(biāo)記抗體進行檢測。不管是哪種方式，每一個斑點都只對應(yīng)一個細胞。

反向ELISpot在檢測抗原特異性細胞方面具有幾大優(yōu)勢：它產(chǎn)生的斑點更加清晰，同時不存在抗原變性的風(fēng)險；此外，它還大大減少了每次檢測所需的抗原數(shù)量。

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Mabtech公司于1986年創(chuàng)辦于瑞典，是一家歐洲的集研究，開發(fā)，銷售，技術(shù)支持為一體的高科技免疫生物技術(shù)公司。Mabtech公司始終專業(yè)致力于研發(fā)新的單克隆抗體，生產(chǎn)創(chuàng)新的免疫試劑和銷售高品質(zhì)的全配套的免疫試劑盒。公司核心業(yè)務(wù)是致力于優(yōu)化發(fā)展酶聯(lián)免疫斑點法技術(shù) (ELISpot)、熒光免疫斑點法技術(shù) (FluoroSpot) 和酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù) (ELISA) 等免疫學(xué)方法。公司開發(fā)和生產(chǎn)多種針對細胞因子，免疫球蛋白和載脂蛋白的單克隆抗體，用于生命科學(xué)研究中的體外應(yīng)用。Mabtech的試劑盒可用于研究感染性疾病，癌癥，過敏，移植等免疫反應(yīng)，通常用作疫苗試驗中的監(jiān)測工具。此外，還生產(chǎn)用于獸醫(yī)和心血管研究的試劑盒。

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