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細(xì)胞外囊泡(EV)染色試第一彈:ExoBrite 細(xì)胞外囊泡(EV)染色試劑盒。
細(xì)胞外囊泡(EV)染色試第一彈:EXOBRITE CTB EV染色試劑盒
1.Exobrite流式抗體偶聯(lián)物:
常用的細(xì)胞外囊泡(EV)標(biāo)記蛋白是CD9、CD63和CD81,它們都是四白蛋白家族的成員。雖然針對這些蛋白質(zhì)的抗體可通過商業(yè)供應(yīng)商獲得,但很少有抗體被驗證或用于檢測EV或外泌體。設(shè)計并驗證了用于流式細(xì)胞術(shù)的ExoBrite Flow Antibody偶聯(lián)物,在純化和串珠結(jié)合的EV中提供明亮的信號和低背景的EV標(biāo)記物。ExoBrite 同型對照流式抗體已被發(fā)現(xiàn)不與人類細(xì)胞中的任何靶標(biāo)發(fā)生反應(yīng),并且與tetraspanin抗體具有相同的同型。
ExoBrite流式抗體的優(yōu)勢:
開發(fā)用于流式細(xì)胞儀檢測EV標(biāo)記CD9, CD63和CD81
純化的珠狀結(jié)合EV驗證
明亮信號和低背景
ExoBrite同型對照流式抗體
多種顏色可用,于Pacific Blue, FITC和PE通道
結(jié)果展示:
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| SEC純化的A549衍生EVs用ExoBrite 650/665 CD9流式抗體染色(左),與緩沖液中的相同抗體相比,可以看到特異性染色(右),在APC通道中的CytoFLEX-LX流式細(xì)胞儀上檢測到外泌體。 |
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| SEC純化的MCF-7衍生EVs用ExoBrite 560/585 CD63流式抗體染色(左),與緩沖液中的相同抗體相比,可以看到特異性染色(右),在PE通道中的CytoFLEX-LX流式細(xì)胞儀上檢測外泌體。 |
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| SEC純化的MCF-7衍生EVs用ExoBrite 410/450 CD81流式抗體染色(左),與緩沖液中的相同抗體相比,可以看到特異性染色(右),在Pacific Blue通道中的CytoFLEX LX流式細(xì)胞儀上檢測到外泌體。 |
相關(guān)產(chǎn)品推薦:
| 產(chǎn)品名稱 | 偶聯(lián)物 | 檢測通道 | 規(guī)格 | 貨號 |
| ExoBrite CD9 Flow Antibody | ExoBrite 410/450 ExoBrite 490/515 ExoBrite 560/585 ExoBrite R-PE | Pacific Blue FITC PE | 25 tests 100 tests | P003-410… P003-RPE |
| ExoBrite CD63 Flow Antibody | P004-410… P004-RPE | |||
| ExoBrite CD81 Flow Antibody | P005-410… P005-RPE | |||
| ExoBrite IgG1 Isotype Control Flow Antibody | P008-410… P008-RPE |
2.ExoBrite親和素磁珠:
使用ExoBrite Streptavidin磁珠簡化EV和外泌體分離工作流程,與同類產(chǎn)品相比,該磁珠可提供更低的背景和更高的EV捕獲靈敏度。這些鏈霉親和素包被和磁性聚苯乙烯珠(直徑4.5um)可用于從細(xì)胞培養(yǎng)基或其他生物流體中分離EV,而無需過夜沉淀步驟。
ExoBrite 親和素磁珠的優(yōu)點(diǎn):
結(jié)合生物素化抗體(不包括)分離EV,
無需過夜沉淀步驟從生物體液中分離EV,
比競爭對手更低的背景和更高的靈敏度方便的磁分離,
通過顯微鏡,流式細(xì)胞術(shù)或western blot檢測下游
結(jié)果展示:
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| 首先將ExoBrite 鏈霉親和素磁珠與(橙色點(diǎn))或不與(灰色點(diǎn))生物素化的CD9抗體一起孵育,然后與濃縮的MCF-7細(xì)胞上清液一起孵育。EV被ExoBrite 560/585 CTB EV染色,并通過流式細(xì)胞儀在PE通道中檢測。 | 首先將ExoBrite 鏈霉親和素磁珠與(橙色點(diǎn))或不與(灰色點(diǎn))生物素化的CD63抗體一起孵育,然后與濃縮的MCF-7細(xì)胞上清液一起孵育。結(jié)合的EV被ExoBrite 560/585 CTB EV染色,并通過流式細(xì)胞儀在PE通道中檢測。 |
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| 首先將ExoBrite 鏈霉親和素磁珠與(橙色點(diǎn))或不與(灰色點(diǎn))生物素化的CD81抗體一起孵育,然后與濃縮的MCF-7細(xì)胞上清液一起孵育。EV被ExoBrite 560/585 CD9流式抗體染色,并通過流式細(xì)胞儀在PE通道中檢測。 | 首先將ExoBrite 鏈霉親和素磁珠與(橙色點(diǎn))或不與(灰色點(diǎn))生物素化的CD81抗體一起孵育,然后與濃縮的MCF-7細(xì)胞上清液一起孵育。EV被ExoBrite 560/585 CTB EV染色,并通過流式細(xì)胞儀在PE通道中檢測。 |
相關(guān)產(chǎn)品推薦:
| 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| ExoBrite Streptavidin Magnetic Beads | 5mL | 28000 |
3.ExoBrite超分辨率成像
由于外泌體和EVs的體積小和光學(xué)顯微鏡的分辨率限制,通過成像來表征它們?nèi)匀皇且粋€挑戰(zhàn)。超分辨率顯微鏡技術(shù),如直接隨機(jī)光學(xué)重建顯微鏡(dSTORM),超越了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的衍射極限,允許對EVs等亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行單分子分辨率。
ExoBrite STORM CTB EV染色劑是為EV的STORM成像而開發(fā)的,有四種經(jīng)過STORM驗證的CF?染料可供選擇。ExoBrite 560/585已經(jīng)在ONI納米成像儀S Mark II上驗證了dSTORM,從而可以研究精細(xì)的形態(tài)學(xué)細(xì)節(jié),并與EV生物標(biāo)志物(如四跨蛋白CD9、CD63和CD81)共染色。
ExoBrite的優(yōu)勢 STORM CTB EV染色:
深入了解EV的形態(tài)和結(jié)構(gòu)
用于STORM成像EV的良好配方CTB偶聯(lián)物
有4種CF?染料可用于STORM成像
允許與EV生物標(biāo)志物進(jìn)行抗體共染色和定位研究
結(jié)果展示:
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| 人類結(jié)直腸癌細(xì)胞系衍生EVs的超分辨dSTORM圖像。EVs用抗tetraspanin抗體(抗CD9/CD63/CD81混合物,均與CF?647綴合,顯示為品紅色)和1X ExoBrite染色 560/585(青色)。使用ONI的EV Profiler試劑盒制備樣品,并使用來自O(shè)NI(Oxford Nanoimaging, UK)的納米成像儀s Mark II獲取樣品。使用ONI基于云的數(shù)據(jù)分析平臺CODI的測試版來處理數(shù)據(jù)。比例尺為500 nm(縮小,左側(cè)),單個EV面板為50 nm(右側(cè))。圖片由ONI提供。 |
相關(guān)產(chǎn)品推薦:
| 產(chǎn)品名稱 | Ex/Em (nm) | 激光(s) (nm) | 檢測通道 | 規(guī)格 | 貨號 |
| ExoBrite STORM CF?505 CTB EV Staining Kit | 505/519 | 488 | FITC | 100 Labelings | 30115-T |
| 500 Labelings | 30115 | ||||
| ExoBrite STORM CF?583R CTB EV Staining Kit | 583/609 | 555 or 561 | Rhodamine or Texas Red? | 100 Labelings | 30116-T |
| 500 Labelings | 30116 | ||||
| ExoBrite STORM CF?647 CTB EV Staining Kit | 652/668 | 633-640 | Cy?5 | 100 Labelings | 30117-T |
| 500 Labelings | 30117 | ||||
| ExoBrite STORM CF?680 CTB EV Staining Kit | 681/698 | 633-640 | Cy?5.5 | 100 Labelings | 30118-T |
| 500 Labelings | 30118 |
4.Exobrite Western Blot抗體偶聯(lián)物
ExoBrite 通過近紅外熒光蛋白質(zhì)印跡驗證了蛋白質(zhì)抗體在EV提取物中提供明亮的信號和低背景的EV標(biāo)記物CD9、CD63和CD81。抗體有兩種近紅外熒光染料ExoBrite 680/700和ExoBrite 770/800,其提供比用于蛋白質(zhì)印跡的具有可見光發(fā)射的染料更大的信噪比。 ExoBrite Calnexin WB抗體可檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中不存在的一種蛋白質(zhì)。作為評價EV提取物純度的陰性對照。
ExoBrite WB抗體的優(yōu)勢:
開發(fā)用于通過熒光蛋白質(zhì)印跡檢測EV標(biāo)記物CD9、CD63和CD81
經(jīng)驗證可與EV提取物一起使用
明亮的信號和低背景
有兩種近紅外顏色可選
陰性對照ExoBrite Calnexin WB可用
結(jié)果展示:
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| 用ExoBrite 680/700 CD9蛋白抗體對MCF-7細(xì)胞和EV裂解物中人CD9進(jìn)行Western檢測,顯示CD9在EV制劑中富集。 | 用ExoBrite 680/700 CD63蛋白抗體對MCF-7細(xì)胞和EV裂解物中人CD63進(jìn)行Western檢測,顯示CD63在EV制劑中富集。 |
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| 用ExoBrite 680/700 CD81蛋白抗體對MCF-7細(xì)胞和EV裂解物中人CD81進(jìn)行Western檢測,顯示EV制劑中CD81的富集。 | 用ExoBrite 770/800 calnexin WB抗體檢測MCF-7細(xì)胞和EV裂解物中的人鈣蛋白酶,顯示EV制劑中缺乏calnexin。 |
相關(guān)產(chǎn)品推薦:
| 產(chǎn)品名稱 | 偶聯(lián)物 | 規(guī)格 | 貨號 |
| ExoBrite CD9 Western Antibody | ExoBrite 680/700 ExoBrite 770/800 | 25 tests 100 tests | P003-680, P003-770 |
| ExoBrite CD63 Western Antibody | P004-680, P004-770 | ||
| ExoBrite CD81 Western Antibody | P006-680, P006-770 | ||
| ExoBrite Calnexin Western Antibody | ExoBrite 770/800 | P007-770 |
Biotium公司是一家在熒光技術(shù)領(lǐng)域獨(dú)樹一幟的生物技術(shù)公司,公司位于美國加利福尼亞的BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。該公司一直致力于開發(fā)和生產(chǎn)用于生物醫(yī)學(xué)研究的熒光指示劑及其他特殊生化產(chǎn)品。其產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生 物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液流動檢測及大規(guī)模藥物篩選等眾多領(lǐng)域。Biotium公司專利產(chǎn)品眾多,包括已經(jīng)被廣泛使用的實時PCR定量熒光染料EvaGreen、具有劃時代意義的凝膠核酸染料Gel Red和GelGreen,以及最新推出的Cheetah Taq熱啟動酶和CF系列蛋白質(zhì)標(biāo)記染料等。
目前,Biotium已將其許多專利技術(shù)授權(quán)給一些主要的國際生物技術(shù)公司,包括安捷倫、BD生物科學(xué)、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。 寶天生物科技(BTProbes)由美國知名熒光試劑企業(yè)Biotium公司于2007年在華成立,是一家專注于生物熒光試劑研發(fā)的高科技企業(yè),是多家歐美企業(yè)長期供貨商,產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個領(lǐng)域。目前寶天可提供超過100款熱賣的熒光蛋白(PE, APC),其他熒光原料(FITC),用于PCR熒光原料(5-FAM,6-TAMRA)等。
作為Biotium在中國的區(qū)域總代理,艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的Biotium的產(chǎn)品。
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