上一章我們學習了B細胞ELISpot分析，這一章我們繼續(xù)深入，學習B細胞FluoroSpot分析。復習Mabtech暢銷特色B細胞ELISpot檢測工具

B細胞FluoroSpot

B細胞FluoroSpot是在ELISpot基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新方法，但不是用酶促反應(yīng)來檢測，而是用熒光檢測。它繼承了ELISpot高靈敏度的特性，并具備多重檢測的能力，能同時檢測幾個分析物，特別適用于細胞數(shù)量較低時的檢測。

B細胞FluoroSpot是對分泌的免疫球蛋白進行直接檢測的有力工具。可用來直接計數(shù)抗體分泌細胞（ASCs）和長期記憶B細胞。相對于常用的細胞流式而言，B細胞FluoroSpot能在十萬個細胞中實現(xiàn)對單個抗原特異性B細胞進行定量檢測，因而具有極高的靈敏度。并且由于其具備多重檢測的能力，因此能研究多種抗原并定義免疫球蛋白亞群。B細胞FluoroSpot的主要應(yīng)用包括檢測B細胞對感染和疫苗接種引起的反應(yīng)。

具體步驟：

1.預包被。單克隆捕獲抗體或抗原加入到經(jīng)乙醇處理的PVDF膜板上；

2.細胞孵化。細胞被加入到孔板中，并分泌抗體。

3.捕獲抗體。分泌抗體就近被預包被的抗體或抗原捕獲；

4.檢測。加入熒光標記的檢測抗體，直接檢測。

5.斑點計數(shù)（可人工計數(shù)，也可用自動讀板儀計數(shù)），數(shù)據(jù)處理，結(jié)果分析。

應(yīng)用

1.抗原可以直接連接到一個熒光基團或重組表達的蛋白標簽（如WASP，GAL），并以帶抗體標簽的共軛抗體進行檢測。這就實現(xiàn)了在一個孔板中分析多種抗原。

2.分泌抗體就近被預包被的抗體或抗原捕獲，并用熒光標記的共軛檢測抗體檢測分泌抗體，從而實現(xiàn)定義免疫球蛋白亞群。

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Mabtech公司于1986年創(chuàng)辦于瑞典，是一家歐洲的集研究，開發(fā)，銷售，技術(shù)支持為一體的高科技免疫生物技術(shù)公司。Mabtech公司始終專業(yè)致力于研發(fā)新的單克隆抗體，生產(chǎn)創(chuàng)新的免疫試劑和銷售高品質(zhì)的全配套的免疫試劑盒。公司核心業(yè)務(wù)是致力于優(yōu)化發(fā)展酶聯(lián)免疫斑點法技術(shù) (ELISpot)、熒光免疫斑點法技術(shù) (FluoroSpot) 和酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù) (ELISA) 等免疫學方法。公司開發(fā)和生產(chǎn)多種針對細胞因子，免疫球蛋白和載脂蛋白的單克隆抗體，用于生命科學研究中的體外應(yīng)用。Mabtech的試劑盒可用于研究感染性疾病，癌癥，過敏，移植等免疫反應(yīng)，通常用作疫苗試驗中的監(jiān)測工具。此外，還生產(chǎn)用于獸醫(yī)和心血管研究的試劑盒。

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