IgG（免疫球蛋白G）是血清中最豐富的Ig同種型，占所有血清免疫球蛋白的約80％。在人類中，存在四種IgG亞類，其具有最高的IgG1血清濃度，接著是IgG2，IgG3和IgG4。在小鼠中，IgG亞類定義為IgG1，IgG2a/c，IgG2b和IgG3。IgG分子由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，用于特異性的結(jié)合抗原。在對(duì)抗原的典型免疫應(yīng)答中，在初始IgM應(yīng)答后能誘導(dǎo)高水平的IgG抗體。

 

     

 

      ELISpot特點(diǎn)：

 

      酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunospot Assay，ELISpot）是一種高靈敏度的在單細(xì)胞水平檢測(cè)細(xì)胞因子或免疫球蛋白分泌的免疫學(xué)檢測(cè)手段。現(xiàn)在被大量應(yīng)用于特異性免疫感染的調(diào)查、癌癥、過(guò)敏，自身免疫性疾病和疫苗開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域。ELISpot檢測(cè)具有相當(dāng)高的靈敏度，即當(dāng)一百萬(wàn)個(gè)陰性細(xì)胞中有一個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞，ELISpot也可檢測(cè)到該陽(yáng)性細(xì)胞。

 

 

      ELISpot原理：

 

      將細(xì)胞置于包被有特異性抗體的96孔板中培養(yǎng)，在有刺激的條件下，細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子或免疫球蛋白會(huì)被包被抗體捕獲。移除細(xì)胞后，被捕獲的細(xì)胞因子可進(jìn)一步使用生物素標(biāo)記的一抗來(lái)標(biāo)識(shí)，其后再與酶標(biāo)記的親和素作用，并加入底物使其呈色，有反應(yīng)作用的細(xì)胞會(huì)留下直徑大小不等的染色斑點(diǎn)。

   

      如何計(jì)數(shù)分泌小鼠IgG的B細(xì)胞？艾美捷科技作為專業(yè)的生命科學(xué)領(lǐng)域解決方案供應(yīng)商，為您推薦Mabtech品牌的ELISpot相關(guān)試劑盒，產(chǎn)品優(yōu)質(zhì)，發(fā)表多篇高分文章。

 

 

      特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)：

 

1.       1、計(jì)數(shù)分泌小鼠IgG以及抗原特異性小鼠IgG的B細(xì)胞。

 

2.       2、試劑盒含有捕獲抗體，檢測(cè)抗體，鏈霉親和素-ALP（HRP）和多克隆激活劑。

 

3.       3、適用于想要設(shè)置和優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的客戶。

 

4.       4、高度敏感，穩(wěn)定且易于標(biāo)準(zhǔn)化。
   

 

Tips：

 

      抗原特異性B細(xì)胞有兩種可供選擇的方式計(jì)數(shù)：在檢測(cè)步驟中通過(guò)用抗原包被或通過(guò)使用生物素化的抗原。對(duì)于記憶B細(xì)胞，我們建議用R848和重組小鼠IL-2（均包括在內(nèi)）進(jìn)行預(yù)刺激。

 

      如下圖，（A）抗原或（B）特異性抗免疫球蛋白的抗體與板結(jié)合。然后，通過(guò)（A）生物素化的抗IgG或（B）生物素化的抗原檢測(cè)抗原特異性抗體。后一種方法產(chǎn)生更明顯的斑點(diǎn)，并且還減少了所需抗原的量。（C）是ELISpot測(cè)定以確定總的IgG。

 

 

      廠家測(cè)試結(jié)果：

 

      貨號(hào)3825-2A，試劑盒含鏈霉親和素-ALP，廠家測(cè)試結(jié)果：

 

      在不存在或存在R848和重組IL-2的情況下，將小鼠脾細(xì)胞預(yù)孵72小時(shí)。然后洗滌細(xì)胞，加入ELISpot孔中并分析總IgG的分泌（100,000個(gè)細(xì)胞/孔，過(guò)夜孵育）。

 

 

      精彩文章鑒賞：

 

      Antigens reversibly conjugated to a polymeric glyco-adjuvant induce protective humoral and cellular immunity. Nature Materials. 2019.

 

   

 

      已發(fā)表文章參考：

 

1.       1、B cells promote insulin resistance through modulation of T cells and production of pathogenic IgG antibodies.Nature Medicine.2011.

 

2.       2、Autoreactive, Low-Affinity T Cells Preferentially Drive Differentiation of Short-Lived Memory B Cells at the Expense of Germinal Center Maintenance.Cell reports.2018.

 

3.       3、Nucleic Acid-Targeting Pathways Promote Inflammation in Obesity-Related Insulin Resistance.Cell reports.2016.

 

4.       4、Immunological responses following administration of a genotype 1a/1b/2/3a quadrivalent HCV VLP vaccine.Sci Rep.2018.

 

5.       5、Oxidation-sensitive polymersomes as vaccine nanocarriers enhance humoral responses against Lassa virus envelope glycoprotein.Virology.2017.

 

      Mabtech公司于1986年創(chuàng)辦于瑞典，是一家歐洲的集研究，開(kāi)發(fā)，銷(xiāo)售，技術(shù)支持為一體的高科技免疫生物技術(shù)公司。Mabtech公司始終專業(yè)致力于研發(fā)新的單克隆抗體，生產(chǎn)創(chuàng)新的免疫試劑和銷(xiāo)售高品質(zhì)的全配套的免疫試劑盒。公司核心業(yè)務(wù)是致力于優(yōu)化發(fā)展酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法技術(shù) (ELISpot)、熒光免疫斑點(diǎn)法技術(shù) (FluoroSpot) 和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù) (ELISA) 等免疫學(xué)方法。公司開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)多種針對(duì)細(xì)胞因子，免疫球蛋白和載脂蛋白的單克隆抗體，用于生命科學(xué)研究中的體外應(yīng)用。Mabtech的試劑盒可用于研究感染性疾病，癌癥，過(guò)敏，移植等免疫反應(yīng)，通常用作疫苗試驗(yàn)中的監(jiān)測(cè)工具。此外，還生產(chǎn)用于獸醫(yī)和心血管研究的試劑盒。

 

      艾美捷科技與國(guó)內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應(yīng)商保持著密切的合作關(guān)系，目前已成為眾多國(guó)際知名品牌的中國(guó)總代理或一級(jí)代理，主要包括：Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Mabtech、Solis BioDyne等，可以在第一時(shí)間為用戶提供最前沿的專業(yè)資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。

 

      作為Mabtech在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供最全面的Mabtech產(chǎn)品以及訂制服務(wù)。