EMSA，所謂何者？

      凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn) (electrophoretic mobility shift assay, EMSA)是一種體外研究DNA結(jié)合蛋白（轉(zhuǎn)錄因子）和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列（靶標(biāo)基因的啟動(dòng)子序列）相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。

      EMSA，知其所以然！

      正如上方實(shí)驗(yàn)示意圖所示， 蛋白質(zhì)可以與核酸探針結(jié)合，電泳時(shí)這種復(fù)合物比無蛋白結(jié)合的探針在凝膠中泳動(dòng)的速度慢，即表現(xiàn)為相對(duì)滯后。通過競爭性對(duì)照組，可以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的特異性。

      EMSA，難點(diǎn)與痛點(diǎn)

       EMSA實(shí)驗(yàn)是很多實(shí)驗(yàn)新手的攔路虎，不僅實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣（凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，紫外交聯(lián)，信號(hào)檢測），而且實(shí)驗(yàn)與對(duì)照組較多（通常為5組，標(biāo)記探針、標(biāo)記探針+蛋白、標(biāo)記探針+蛋白+未標(biāo)記探針（特異競爭寡核苷酸）、標(biāo)記探針+蛋白+未標(biāo)記突變探針、標(biāo)記探針+蛋白+抗體），經(jīng)過多次測試優(yōu)化才能獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，綜合成本非常高。

      突破EMSA，創(chuàng)新的新方法，Nature為您測試：

      作為表觀遺傳學(xué)的專業(yè)解決方案供應(yīng)商，艾美捷科技為您推薦，Epigentek品牌創(chuàng)新推出的通用蛋白-DNA結(jié)合分析試劑盒（比色法）：

      * 客戶需自行準(zhǔn)備如下材料：[1]生物素標(biāo)記的特異性探針; [2]未標(biāo)記的特異性探針；[3]目標(biāo)蛋白的一抗與HRP-二抗

      通用蛋白質(zhì)-DNA結(jié)合分析試劑盒原理：

      通用蛋白質(zhì)-DNA結(jié)合分析試劑盒（比色），用于測量核提取物中轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合活性。在實(shí)驗(yàn)中，含有靶向轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合共有序列的生物素標(biāo)記的雙鏈寡核苷酸（寡核苷酸）與結(jié)合試驗(yàn)緩沖液中的核提取物一起溫育。核提取物中活性形式的轉(zhuǎn)錄因子與其共有序列結(jié)合。然后將寡蛋白復(fù)合物捕獲到測定微孔上。靶蛋白可以通過高親和力抗體識(shí)別，并通過檢測抗體 - 顯色試劑反應(yīng)系統(tǒng)進(jìn)行比色測量。

      產(chǎn)品特點(diǎn)與優(yōu)勢：

1.       1、最快的程序：完整的檢測可在3小時(shí)內(nèi)完成。

 


2.       2、可拆卸微孔板，使測定靈活：手動(dòng)或高通量分析。

  

3.       3、比色法分析，無放射性材料，更安全。

 


4.       4、簡單，可靠，一致的檢測條件。

 

      Nature文章發(fā)表結(jié)果：

      《Klengel, Torsten, et al. "Allele-specific FKBP5 DNA demethylation mediates gene–childhood trauma interactions." Nature neuroscience 16.1 (2013): 33.》

      rs1360780基因的A/G等位基因與TBP的結(jié)合能力分析，A等位基因的親和力明顯高于G.

      更多發(fā)表文章，歡迎了解：

      Hekmat-Scafe DS et. al. (November 2016). Using yeast to determine the functional consequences of mutations in the human p53 tumor suppressor gene: An introductory course-based undergraduate research experience in molecular and cell biology.Biochem Mol Biol Educ.

      Jang JY et. al. (February 2016). Targeting adenine nucleotide translocase-2 (ANT2) to overcome resistance to epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor in non-small cell lung cancer. Mol Cancer Ther.

      Koh J et. al. (October 2015). EML4-ALK enhances programmed cell death-ligand 1 expression in pulmonary adenocarcinoma via hypoxia-inducible factor (HIF)-1α and STAT3 OncoImmunology.

      Gao Y The Univer et. al. (June 2014). Up-regulation of Hepatic VLDLR via PPARα Is Required for the Triglyceride-Lowering Effect of Fenofibrate. J Lipid Res.

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