熒光染料又稱為熒光探針, 因具備檢測速度快、重復(fù)性好、用樣量少、無輻射等優(yōu)點，成為大家廣泛使用的熒光標(biāo)示劑。同時也是細胞生物學(xué)等科學(xué)研究中不可或缺的重要工具，利用熒光探針可測定RNA和DNA的結(jié)構(gòu)、研究DNA堿基損傷修復(fù)、辨別蛋白質(zhì)分子中氨基的狀態(tài)和蛋白質(zhì)分子的活性區(qū), 檢測pmol級的蛋白質(zhì) ,區(qū)分不同構(gòu)象的核酸以及有關(guān)藥物的化學(xué)反應(yīng)活性。熒光免疫分析采用時間-分辨技術(shù)可用于許多蛋白質(zhì)、激素、病毒抗原及DNA雜交體的分析。激光誘導(dǎo)熒光光譜在活細胞、活體體液、DNA堿基序列和細菌原體的鑒定、惡性腫瘤的早期診斷和治療中起到了重要的作用。

由于大多數(shù)熒光染料不具備選擇性，被固載在生物活性載體的熒光染料，可利用生物活性物質(zhì)之間的選擇性（抗原抗體，生物素鏈霉親和素），或者通過染料分子用適當(dāng)?shù)男揎椆倌軋F，通過官能團之間的相互反應(yīng)，實現(xiàn)對目標(biāo)物質(zhì)的靶向性標(biāo)記，下面我們就來給大家介紹常見的幾類活性熒光染料：

活性熒光素及其衍生物廣泛用于共價標(biāo)記生物分子，例如抗體，碳水化合物，核酸，蛋白質(zhì)，肽和寡核苷酸。各活化官能團對應(yīng)的反應(yīng)基團如下：

琥珀酰亞胺酯（Succinimidyl esters）/ NHS酯-用于標(biāo)記抗體，蛋白質(zhì)，肽，胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離氨基（-NH 2）

馬來酰亞胺（Maleimides）-用于標(biāo)記抗體，蛋白質(zhì)和肽上的巰基

疊氮化物(Azides)-通過點擊化學(xué)法（Click）標(biāo)記乙烯基

炔烴(Alkynes)-通過點擊化學(xué)方法標(biāo)記疊氮化物

酰肼(Hydrazides)-用于標(biāo)記醛基和酮基

羧酸(Carboxylic acids)-經(jīng)碳二亞胺預(yù)活化后用于標(biāo)記胺或用于醇的Steglich酯化

氨基(Amines)-具有游離氨基的熒光染料，用于與各種親電子化合物（如活化的酯和環(huán)氧化物）偶聯(lián)。

四嗪（Tetrazines）-通過反電子需求Diels-Alder反應(yīng)標(biāo)記反式環(huán)辛烯(TCO)，，環(huán)丙烯和其他活化的烯烴。

亞磷酰胺(Phosphoramidite)-亞磷酰胺標(biāo)記的染料可用于標(biāo)記寡核苷酸

環(huán)炔(Cycloalkyne)-具有環(huán)炔基部分的染料可用于無銅點擊化學(xué)反應(yīng)。

氨基活性熒光染料：

羰基活性染料：

炔烴活性染料：

更多活性染料選擇請參見下圖：

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