NO作為一種簡單的信號分子，廣泛存在于各生物體組織中。NO有非常活躍的氧化還原特性，賦予了它獨特，重要的生理功能，NO可以與蛋白質(zhì)特定位點的半胱氨酸上的巰基殘基特異性的共價結(jié)合，發(fā)生S-亞硝基化修飾作用，得到S-亞硝基巰基，從而進(jìn)一步調(diào)節(jié)目標(biāo)蛋白的結(jié)構(gòu)和活性。

大量研究結(jié)果證實，蛋白質(zhì)S-亞硝基化在生物體內(nèi)具有很多重要的生理學(xué)作用，亞硝基化蛋白產(chǎn)物在多種疾病中表現(xiàn)出異常升高和降低，關(guān)節(jié)炎、支氣管肺炎、糖尿病、多種硬化癥、中風(fēng)等疾病中蛋白質(zhì)巰基亞硝基化產(chǎn)物較正常水平明顯增多；在哮喘、新生兒血氧不足、肺氣腫等疾病中蛋白質(zhì)巰基亞硝基化產(chǎn)物較正常水平明顯降低。

S-亞硝基化蛋白檢測：

鑒于蛋白的S-亞硝化在諸多疾病中的廣泛生理學(xué)作用，對樣本中的S-亞硝化蛋白水平進(jìn)行準(zhǔn)確檢測就顯得尤為重要了，在這里，艾美捷給您帶來了一款大家都在用的S-亞硝化蛋白檢測試劑盒（Cat# 10006518），該試劑盒基于經(jīng)典的生物素轉(zhuǎn)換原理，將-S-NO轉(zhuǎn)化為S-C-Biotin，再通過檢測生物素來表征-S-NO，該試劑盒使用簡單、方便、用時短，樣品可直接用于WB檢測和IF檢測，在Nature Cell Biology，Nature Communication，Cancer Research等眾多高分雜志上被引用。

檢測原理：1. 封閉樣本蛋白上游離的巰基； 2. 樣本蛋白上S-亞硝基巰基被還原生成與馬來酰亞胺生物素共價標(biāo)記的游離硫醇； 3. 隨后用親和素偶聯(lián)試劑檢測生物素標(biāo)記的蛋白。

將樣本中S-亞硝基化蛋白帶上生物素標(biāo)記之后，該試劑盒提供了2種表征S-亞硝基化蛋白的方法：

1、類似于WB的方法：用鏈霉親和素標(biāo)記的HRP去定位生物素標(biāo)記的蛋白，然后再用HRP的底物進(jìn)行檢測，適合于檢測細(xì)胞/組織裂解液中的S-亞硝基化蛋白。

2、類似于IHC/IF的方法：這種方法也是將蛋白上的S-NO基團(tuán)用生物素取代，然后用鏈霉親和素標(biāo)記的熒光素進(jìn)行定位檢測，只是樣本處理方法跟WB法不太一樣，此方法適合于檢測細(xì)胞/組織切片中的S-亞硝基化蛋白。

相關(guān)產(chǎn)品推薦：

10006518使用過程中的常見問題（FAQ）：

1、在S-亞硝化蛋白檢測試劑盒（Cat# 10006518）檢測過程中，是否有哪個步驟可以暫時中止實驗然后將樣本過夜保存？

是的，可以在樣品制備部分（Sample Preparation）下的Step 7或Step 13兩個步驟中，在丙酮將蛋白沉淀后即可暫時中止實驗，然后將沉淀物在-20°C下過夜保存。

2、如果沒有暗室，在間接光照下進(jìn)行Step 1-12可以嗎？

如果沒有暗室，您可以關(guān)閉實驗室中的部分頂燈，并避免在工作臺上開燈直射。

3、試劑盒說明書中，只有針對于細(xì)胞樣本的處理方案，沒有針對于完整組織的方案，完整的組織能用這個試劑盒嗎？

對于軟組織樣本，可以分離細(xì)胞：分離，洗滌和沉淀細(xì)胞，按Step 3裂解細(xì)胞并封閉游離巰基。對于硬組織樣品，在20mM Tris pH 8.0或P-SNO細(xì)胞裂解液（Buffer A）中制備0.1g/ml緩沖液勻漿。離心（1000xg，10min）除去大的細(xì)胞碎片。如果需要進(jìn)一步勻漿處理，將上清至于-20℃孵育1h，再將冰冷的上清液重復(fù)勻漿化或者超聲處理（確保完全裂解，通過顯微鏡檢查是否剩余完整細(xì)胞）。如果需要，定量蛋白質(zhì)濃度并稀釋至2mg / mL，將復(fù)溶的封閉試劑(1ml儲備液)以1:9的比例加入到當(dāng)前的樣品中，此時的樣品可視作Step 4中細(xì)胞裂解液。

4、這個試劑盒是可以用含有β-巰基乙醇的Laemmli緩沖液嗎？

是的，這個試劑盒可以用含有β-巰基乙醇的Laemmli緩沖液，β-巰基乙醇不會影響蛋白上標(biāo)記的生物素。

5、這款S-亞硝基化蛋白質(zhì)檢測試劑盒適用的樣品類型有哪些了？

這款試劑盒適用的樣本類型有：培養(yǎng)的細(xì)胞、血細(xì)胞沉淀、純化的蛋白質(zhì)。如果樣本是純化的蛋白質(zhì)，首先需要將蛋白質(zhì)樣品在含有封閉試劑的Buffer A中重新配制成2mg / ml; 這個濃度將使封閉試劑過量。此時，蛋白質(zhì)上的游離巰基將被封閉，然后可以繼續(xù)Step 6中丙酮沉淀步驟。對于凝膠分析，每個泳道加載1-5μg蛋白質(zhì)就可以，以避免加載過量的蛋白質(zhì)。

部分引文賞析：

1.Li, L., Zhu, L., Hao, B., et al. iNOS-derived nitric oxide promotes glycolysis by inducing pyruvate kinase M2 nuclear translocation in ovarian Oncotarget 8(20), 33047-33063 (2017).

2.Lee, W.-B., Kang, J.-S., Choi, W.Y., et al. Mincle-mediated translational regulation is required for strong nitric oxide production and inflammation resolution. Nat. Commun. 7, 11322 (2016).

3.Vatolin, S., Phillips, J.G., Jha, B.K., et al. Novel protein disulfide isomerase inhibitor with anticancer activity in multiple myeloma. Cancer Res. 76(11), 3340-3350 (2016).

4.Salanova, M., Schiffl, G., Gutsmann, M., et al. Nitorsative stress in human skeletal muscle attenuated by exercise countermeasure after chronic disuse. Redox Biol. 1, 514-526 (2013).

5.Park, Y.-J., Yoon, S.-J., Suh, H.-W., et al. TXNIP deficiency exacerbates endotoxic shock via the induction of excessive nitric oxide synthPLoS Pathog. 9(10), e1003646 (2013).

作為一家具有高端的技術(shù)實力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)，總部位于武漢光谷高新技術(shù)開發(fā)區(qū)，服務(wù)面向全國。艾美捷科技是集進(jìn)口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品、整合的解決方案，及優(yōu)質(zhì)的物流服務(wù)。為了更好的服務(wù)客戶，公司組建了一支經(jīng)驗豐富的研發(fā)團(tuán)隊-艾美捷生物技術(shù)中心，進(jìn)入研發(fā)生產(chǎn)階段，將更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品推薦給國內(nèi)生物領(lǐng)域的同仁們!

艾美捷科技與國內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應(yīng)商優(yōu)保持著密切的合作關(guān)系，目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理，主要包括：AmyJet、AATBioquest、Abbexa、Abnova、Agrisera、Anogen、Atlas Antibodies、Biosensis、Biovision、BioVendor、CaissonLabs、Cell Biolabs、Crystal Chem、Cytoskeleton、Demeditec、Duchefa、Epigentek、Equitech-Bio、EXBio、Fitzgerald、GeneCopoeia、HycultBiotech、Icosagen、ImmunoReagents、ImmunoStep、Jackson、LC Laboratories、LifeSensors、LigaTrap、Lumiprobe、Mabtech、Matreya、MyBiosource、NorgenBiotek、Origene、ProImmune、ProSpec、ScyTek、SolisBioDyne、SouthernBiotech、StressMarq、SySy、USBiological、TRC等，可以在短時間內(nèi)為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。