VitroGel類(lèi)器官回收溶液是一種即用型、非酶細(xì)胞回收溶液，用于快速高效地從VitroGel或基于動(dòng)物的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）中回收類(lèi)器官或3D培養(yǎng)的細(xì)胞。VitroGel類(lèi)器官回收溶液在室溫下穩(wěn)定，并具有中性pH值。回收的細(xì)胞可以在2D和3D培養(yǎng)中進(jìn)行亞培養(yǎng)。VitroGel細(xì)胞回收溶液可以在水凝膠標(biāo)本固定和染色制備之前或之后使用，以確保高質(zhì)量的下游數(shù)據(jù)分析。VitroGel類(lèi)器官回收溶液也可用于從2D細(xì)胞外基質(zhì)涂層板中收獲細(xì)胞。VitroGel類(lèi)器官回收溶液支持高恢復(fù)率和細(xì)胞活性，適用于細(xì)胞傳代、冷凍保存或隨后的生化分析中的完整類(lèi)器官/細(xì)胞。

1、回收動(dòng)物源ECM中的細(xì)胞/類(lèi)器官(如Matrigel, Cultrex, and Geltrex)

方案一 動(dòng)物源ECM培養(yǎng)的細(xì)胞/類(lèi)器官的回收 

注意：對(duì)動(dòng)物源ECM細(xì)胞/類(lèi)器官回收之前，將VitroGel回收液冷卻至4℃以獲得z佳效果。

1.從動(dòng)物源ECM培養(yǎng)板中吸除培養(yǎng)基。

2.向24孔板的每孔中加入1 mL預(yù)冷的VitroGel回收液(4°C預(yù)冷)。

3.將凝膠和溶液一起轉(zhuǎn)移到15 mL的離心管中。（可選:另加1 mL回收液洗滌培養(yǎng)板，并將其混合到離心管中。） 

4.輕輕上下吹吸5-10次，將離心管放在冰上或放在冰箱中2-5分鐘，使ECM分離。（可選:搖晃離心管2-5分鐘，而不是移液吹吸。） 

5.4°C,100 x g，離心3-5分鐘。 

6.除去上清。細(xì)胞應(yīng)準(zhǔn)備好傳代或儲(chǔ)存。（可選:將類(lèi)器官分解成更小的碎片，將細(xì)胞重懸在培養(yǎng)基中，徹底移液并再次離心。）

注意：由于動(dòng)物源ECM的蛋白質(zhì)濃度不同，可能需要將細(xì)胞重新懸浮在額外的VitroGel回收液中(重復(fù)步驟4至6)，以完全去除ECM。 

方案二 從動(dòng)物源ECM包被板中回收iPSC

1.從動(dòng)物源ECM培養(yǎng)板中吸除培養(yǎng)基。 

2.在6孔板的每孔中加入2 mL PBS溶液，洗滌。 

3.在6孔板的每孔中加入1 mL的VitroGel細(xì)胞回收液。 

4.室溫孵育培養(yǎng)板3-5分鐘。（可選:將培養(yǎng)板放入冰箱2-5分鐘，加速ECM解離。） 

5.每孔加入1 mL培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL的離心管中。 

6.用1 mL培養(yǎng)基清洗兩遍，將培養(yǎng)液混合到離心管中。

7.在4℃，100 x g的條件下離心3-5分鐘，回收iPSC。  

2、VitroGel水凝膠系統(tǒng)中回收細(xì)胞/類(lèi)器官示意圖

以24孔板為例，以下方案一和方案二的選擇取決于細(xì)胞和水凝膠的條件，如果水凝膠中的細(xì)胞直徑大于500 um，建議使用方案一; 如果使用的是高濃度水凝膠(1：0或1：1稀釋)或水凝膠中細(xì)胞的直徑小于500 um，則推薦使用方案二。 

方案一 使用移液管

1.將VitroGel回收液溫?zé)嶂?7°C。 

2.將細(xì)胞從培養(yǎng)箱中取出，吸除覆蓋水凝膠頂部的培養(yǎng)基。用DPBS清洗水凝膠2次。 

3.向孔中加入1 mL溫?zé)岬腣itroGel回收液，并用10 mL移液管輕輕上下吹吸，使水凝膠變成小塊，加速水凝膠的溶解。

4.向15 mL離心管中加入5 mL預(yù)熱的VitroGel回收液，并將水凝膠轉(zhuǎn)移到管中。（可選:用1 mL溫?zé)岬腣itroGel回收液沖洗培養(yǎng)孔，并將溶液混合到離心管中） 

5.使用10 mL的移液管輕輕上下吹吸2-5次，然后將離心管水浴2-3分鐘。重復(fù)此循環(huán)2-3次。(根據(jù)凝膠強(qiáng)度和細(xì)胞類(lèi)型，優(yōu)化移液次數(shù)和重復(fù)次數(shù)) 

6.室溫下100 × g離心3-5分鐘，收集細(xì)胞(根據(jù)不同細(xì)胞類(lèi)型，優(yōu)化離心速度和時(shí)間)。（可選:如果細(xì)胞顆粒頂部仍有一些水凝膠，用5 mL溫?zé)岬腣itroGel回收液重懸細(xì)胞，再重復(fù)步驟4至6。）  

方案二 使用實(shí)驗(yàn)刮刀

1.將VitroGel回收液溫?zé)嶂?7°C。 

2.將細(xì)胞從培養(yǎng)箱中取出，吸除覆蓋水凝膠頂部的培養(yǎng)基。用DPBS清洗水凝膠2次。 

3.向孔中加入1 mL溫?zé)岬腣itroGel回收液，用刮刀將水凝膠從孔板上分離。 

4.向15 mL離心管中加入5 mL預(yù)熱的VitroGel回收液，并將水凝膠轉(zhuǎn)移到管中。（可選:用1 mL溫?zé)岬腣itroGel回收液沖洗培養(yǎng)孔，并將溶液混合到離心管中） 

5.搖動(dòng)離心管20次，然后將離心管水浴2-3分鐘。重復(fù)這個(gè)循環(huán)3-5次。(根據(jù)凝膠強(qiáng)度和細(xì)胞類(lèi)型，優(yōu)化搖擺時(shí)間和重復(fù)次數(shù))。 

6.室溫下100 x g離心3-5分鐘，收集細(xì)胞(根據(jù)不同的細(xì)胞類(lèi)型，優(yōu)化離心機(jī)的速度和時(shí)間)。（可選:如果細(xì)胞顆粒頂部仍有一些水凝膠，用5 mL溫?zé)岬腣itroGel回收液重懸細(xì)胞，再次重復(fù)步驟5和6。）  案例

使用VitroGel 類(lèi)器官回收溶液（貨號(hào)MS04）通過(guò)兩種不同的方法從Matrigel中回收類(lèi)器官。 

方法 1：用VitroGel類(lèi)器官回收液重懸類(lèi)器官，移液槍將類(lèi)器官吹打成小片段進(jìn)行傳代培養(yǎng)/擴(kuò)增。

方法 2：在不使用移液槍的情況下，搖動(dòng)裝有類(lèi)器官和VitroGel類(lèi)器官回收液混合物的試管，以獲得完整的類(lèi)器官。 

在這兩種情況下，VitroGel類(lèi)器官回收液都保存在4℃中，以在使用前保持低溫。在離心之前，將類(lèi)器官/基質(zhì)膠和VitroGel回收液混合物在室溫下孵育2分鐘。第0天的圖像顯示了用兩種不同方法回收后的類(lèi)器官的形態(tài)。

使用VitroGel類(lèi)器官回收液從2D Matrigel涂層板回收iPSC

VitroGel類(lèi)器官回收液可用于從2D Matrigel涂層板回收iPSC細(xì)胞。使用前將溶液預(yù)熱至室溫。A) 細(xì)胞從Matrigel涂層板上脫離的形態(tài)。（加入VitroGel類(lèi)器官回收液后3分鐘），B) 收獲細(xì)胞后的孔板圖像。（顯示所有細(xì)胞已從Matrigel涂層板上移除），C) 重新接種到新Matrigel涂層板后的細(xì)胞形態(tài)（第3天）。  

參考文獻(xiàn)

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