流式細(xì)胞術(shù)是一種強(qiáng)大的技術(shù)，用于測量和分析單個(gè)顆粒在溶液中通過光束時(shí)的物理特性。可以測量諸如相對大小和熒光等屬性，而熒光標(biāo)記的抗體則能夠使細(xì)胞被檢測出多種蛋白質(zhì)和分子動(dòng)態(tài)。流式細(xì)胞術(shù)能夠?qū)?xì)胞群體進(jìn)行快速的多參數(shù)分析，這在生物醫(yī)學(xué)研究中非常有用。通過使用特定熒光標(biāo)記的抗體，研究人員可以同時(shí)檢測細(xì)胞表面的多個(gè)抗原，從而了解細(xì)胞的表型和功能。此外，流式細(xì)胞術(shù)還可以用于監(jiān)測細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活性，以及細(xì)胞周期的不同階段。

復(fù)習(xí)：二抗格式

- 全分子IgG抗體：是常見的二抗形式，能夠與一抗的Fc區(qū)結(jié)合。

- F(ab')2片段抗體：由IgG經(jīng)蛋白酶處理得到，包含兩個(gè)Fab臂，但沒有Fc區(qū)。在染色組織或細(xì)胞時(shí)，由于缺乏Fc區(qū)，可以避免因細(xì)胞表面表達(dá)的Fc受體導(dǎo)致的非特異性結(jié)合背景。

- FabuLight - Fc特異性Fab片段抗體：通過木瓜蛋白酶消化IgG并去除Fc片段制成。這些單價(jià)Fab片段特異性針對一抗的Fc區(qū)，不會(huì)與一抗的抗原結(jié)合區(qū)發(fā)生相互作用。偶聯(lián)的FabuLight 可用于在與實(shí)驗(yàn)樣本孵育前對一抗進(jìn)行標(biāo)記，節(jié)省孵育和洗滌步驟，同時(shí)像F(ab')2片段一樣，能夠通過防止Fc受體結(jié)合來減少背景染色。

流式細(xì)胞術(shù)的熒光偶聯(lián)物

Jackson ImmunoResearch提供多種熒光染料偶聯(lián)的二抗，這些熒光染料涵蓋從紫外到遠(yuǎn)紅的整個(gè)光譜范圍，可根據(jù)儀器的能力進(jìn)行選擇。包括Alexa Fluor、Brilliant Violet、Cyanine，以及三種大型明亮的熒光蛋白（R-PE、APC和PerCP），可設(shè)計(jì)出滿足儀器能力和實(shí)驗(yàn)需求的流式細(xì)胞術(shù)染料組合。

實(shí)驗(yàn)對照

對照對于驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)和解釋結(jié)果至關(guān)重要。ChromPure 蛋白從非免疫動(dòng)物的血清中純化，是適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)對照。同種型對照是一種陰性對照，可用于估計(jì)抗體的非特異性結(jié)合。同種型對照是與實(shí)驗(yàn)中使用的抗體的宿主物種和類別相匹配的抗體，但不針對感興趣的抗原。同種型對照應(yīng)與特異性抗體一樣，用相同的報(bào)告分子偶聯(lián)。

間接流式細(xì)胞術(shù)

在流式細(xì)胞術(shù)中，直接法通常是指將熒光染料直接偶聯(lián)到一抗上，而間接法則是使用熒光標(biāo)記的二抗來識(shí)別未標(biāo)記的一抗。間接法的優(yōu)勢在于可以通過二抗放大信號(hào)，從而提高檢測的靈敏度，這在檢測低豐度或弱表達(dá)的抗原時(shí)特別有用。圖1中的數(shù)據(jù)清楚地展示了間接法在信號(hào)強(qiáng)度上的優(yōu)勢，這對于需要高靈敏度檢測的實(shí)驗(yàn)來說是一個(gè)重要的考量因素。此外，間接法還允許使用同一二抗與多種一抗結(jié)合，增加了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的靈活性。不過，間接法也可能帶來更高的背景噪音，因此選擇合適的二抗和對照對于獲得準(zhǔn)確結(jié)果至關(guān)重要。

 直接和間接流式細(xì)胞術(shù)方法的比較

在用氯化銨裂解紅細(xì)胞后，對人類外周血門控淋巴細(xì)胞進(jìn)行CD3表達(dá)分析，使用了直接或間接流式細(xì)胞術(shù)。比較平均熒光強(qiáng)度顯示，間接方法產(chǎn)生的信號(hào)更亮（22,973），相比于直接方法（8,985）。（實(shí)驗(yàn)在BD FACSCelesta上執(zhí)行）。

產(chǎn)品舉例：

Jackson ImmunoResearch 提供的二抗產(chǎn)品在流式細(xì)胞術(shù)中表現(xiàn)出色，它們的高特異性和低非特異性結(jié)合特性使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可靠。特別是，Jackson的FabuLight?二抗，由于其單價(jià)特性，可以更精確地標(biāo)記一抗，減少背景染色，提高實(shí)驗(yàn)的信噪比。此外，Jackson的ChromPure?蛋白作為實(shí)驗(yàn)對照，可以有效地幫助研究人員評估抗體的特異性結(jié)合，從而確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。這些高質(zhì)量的產(chǎn)品和對照使得Jackson ImmunoResearch成為流式細(xì)胞術(shù)研究中不可或缺的合作伙伴。