DNA甲基化是在DNA甲基化轉移酶（DNA methytransferase，DNMT）的作用下，在基因DNA序列CpG二核苷酸的胞嘧啶5’-碳位共價結合一個甲基基團而形成5mC。5hmC是5mC的羥基化形式，1952年在噬菌體DNA中首次發(fā)現(xiàn)。研究發(fā)現(xiàn)5hmC是10-11易位（ten-eleven translocation，TET)家族蛋白通過氧化5mC產(chǎn)生的，進一步可被氧化為5fC和5caC。

與5mC相比，5hmC的含量更低，但5hmC也具有非常重要的生物學功能，研究表明，5hmC參與了基因表達的轉錄調控，并在DNA去甲基化過程中發(fā)揮重要作用。另外，5hmC可能與特定腫瘤的發(fā)生密切相關，有可能成為腫瘤早期診斷的生物標志物。因此掌握5hmC在基因組DNA中的定量和定位信息是非常必要的。但研究最初卻面臨著巨大的技術挑戰(zhàn)：一方面是因為標準的生物化學方法不容易區(qū)分5mC和5hmC；另一方面是由于哺乳動物基因組中的胞嘧啶衍生物在胞嘧啶中所占的比例很低，因此精確檢測其含量十分困難。

傳統(tǒng)的DNA甲基化特異性修飾位點的檢測研究主要是通過重亞硫酸鹽反應，將含有修飾位點的序列轉化為正常DNA序列的過程。首先，對待測DNA進行重亞硫酸鹽處理，未甲基化胞嘧啶（C）轉化為尿嘧啶（U），PCR擴增后轉化為胸腺嘧啶（T），而甲基化C不發(fā)生變化。通過與未處理DNA的序列進行比對，可以判斷DNA的甲基化位點及覆蓋程度。但這種方法不能區(qū)分5mC和5hmC，在重亞硫酸鹽修飾過程中，甲基化的C包括5mC和5hmC，均保持不變，通過這種方法得到的所謂5mC其實是5mC與5hmC的集合，在后續(xù)的檢測方法中也無法識別二者。

Epigentek新推出了一套經(jīng)過驗證的BisulPlus Loci 5mC & 5hmC Detection PCR Kit， 可鑒定并檢測5hmC和5mC。此試劑盒操作簡便，只需三步：

第一步：重亞硫酸鹽轉化待測DNA，未甲基化C轉化為U，PCR擴增后轉化為T，5mC不變，5hmC被轉化為5-亞甲基磺酸胞嘧啶（CMS）

第二步： APOBEC脫氨酶催化亞硫酸鹽轉化后的DNA，將5mC轉化為T，而CMS不變，PCR擴增后仍為C。

第三步：通過qPCR分析比較處理和未處理的DNA序列，實現(xiàn)對DNA 5mC&5hmC甲基化的定量和定位檢測。

【產(chǎn)品特點】

1. 同時檢測：5hmC和5mC經(jīng)DNA轉化處理后，通過qPCR達到平行鑒定的目的

2. 方法新穎：亞硫酸氫鹽結合胞嘧啶脫氨酶（APOBEC）轉化5mC，以達到鑒定5hmC的目的

3. 高特異性：5hmC除了可以區(qū)別于5fC和5caC，也可與C和5mC區(qū)分開

4. 反應靈活：可同時分別進行5hmC和5mC各24次鑒定反應，或僅5mC 48次反應

5. 操作便捷：可在5小時內(nèi)完成

6. 轉化率高：C- U轉化率> 99％，5mC-T轉化率> 95％

7. 樣品適用性廣：起始材料可以是從各種組織/細胞樣品中分離的基因組DNA

 Epigentek（美國）公司成立于2005年，是全球領先的表觀遺傳學研究相關產(chǎn)品的開發(fā)商和供應商。公司開發(fā)的綜合產(chǎn)品線包含1100多種專利產(chǎn)品，為表觀遺傳學方面的研究和新藥研發(fā)提供全面系統(tǒng)的解決方案。公司專業(yè)提供DNA甲基化試劑盒、組蛋白修飾相關試劑盒、染色質免疫沉淀試劑盒、基因表達與沉默試劑盒、DNA損傷及修復試劑盒、SUMO化修飾分析試劑盒、表型相關抗體等表觀遺傳學產(chǎn)品。

艾美捷作為Epigentek的中國區(qū)域代理，將為客戶提供完整的表觀遺傳解決方案，產(chǎn)品包括表觀遺傳研究用分析試劑盒、抗體以及相關的抑制劑/拮抗劑等產(chǎn)品。更多信息，歡迎垂詢艾美捷科技有限公司！