Chondrex：免疫級牛源II型膠原蛋白和完全/不完全弗式佐劑

類風濕關節炎（RA）是一種慢性的、侵蝕性的、對稱性的自身免疫性多關節炎，其病因不明。RA的發病機制主要涉及免疫耐受的破壞，導致免疫細胞的激活和自身抗體的產生，最終引起關節和其他身體系統的損傷。RA的全球患病率約為0.5-1%，對社會造成了沉重的負擔。由于RA的長期治療和患者的工作年限損失，RA的治療和管理成為一個重要的公共衛生問題。近年來，RA的早期診斷和治療逐漸成為研究熱點。研究表明，在RA的臨床癥狀出現之前，關節軟骨已經發生了病理變化。因此，早期干預可能改變RA的疾病進程，減輕患者的長期負擔。

間充質干細胞（MSCs）因其多向分化潛能和免疫調節功能，在RA的治療中展現出潛力。特別是MSCs衍生的細胞外囊泡，如微囊泡（MVs）和外泌體（Exos），被認為能夠模擬MSCs的功能，具有治療潛力且避免了細胞治療的復雜性。”MSC–microvesicles protect cartilage from degradation in early rheumatoid arthritis via immunoregulation” 研究了間充質干細胞（MSCs）衍生的微囊泡（MVs）在早期類風濕關節炎（RA）中對關節軟骨的保護作用。

實驗方法

本研究采用了多種實驗方法來驗證MSCs-MVs對早期RA中關節軟骨的保護作用。首先，從健康人臍帶中分離并培養了MSCs，并通過流式細胞術和三系分化實驗驗證了其干細胞特性。隨后，通過梯度離心法從MSCs培養上清中分離出MVs，并通過透射電子顯微鏡（TEM）和ZetaView分析了MVs的大小、形態和數量。免疫印跡(WB)和流式細胞術進一步確認了MVs表面標志物的表達。為了建立CIA模型，雄性DBA/1J小鼠被隨機分為CIA組、MSCs-MVs治療組和對照組。CIA組小鼠在第0天和第21天尾靜脈注射膠原乳化劑以誘導關節炎。

膠原誘導的關節炎（CIA）模型：

雄性DBA/1J小鼠（n=42），年齡6-7周，環境1周。所有小鼠在整個研究期間都被安置在通風的籠子里，提供無菌食物和充足的水。免疫級牛源II型膠原蛋白（Chondrex，貨號#20022）溶解在0.05 M的乙酸中，以達到最終濃度2 mg/mL，隨后輕輕攪拌并在4°C下過夜儲存。在添加佐劑后，進行冰上超聲處理（功率30%，工作3秒，暫停3秒，總時間5分鐘），直到乳化劑滴停止在水中分散。隨后，0.1 mL的乳化劑[50 μL的完全弗式佐劑（Chondrex，貨號#7009）/不完全弗式佐劑（Chondrex，貨號#7002）+50 μL的膠原]在第0天和第21天注射到每只小鼠的尾基部。在第22天，MSCs-MVs治療組（n=6）接受了每周一次的MVs靜脈注射，劑量為10^8/100 μL，持續4周。對照組小鼠則接受等量的磷酸鹽緩沖液（PBS）注射。在實驗期間，定期記錄小鼠的關節炎評分、體重變化，并通過影像學和組織學方法評估關節破壞程度。

實驗中用到的膠原蛋白和佐劑：

此外，還進行了體外實驗以進一步驗證MSCs-MVs對軟骨細胞的影響。從RA患者和健康人軟骨中分離出軟骨細胞，并與MSCs-MVs共培養。通過WB、定量PCR、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）和免疫熒光等方法檢測了炎癥因子和軟骨降解標志物的表達變化。

實驗結果

體內實驗結果顯示，與CIA組相比，MSCs-MVs治療組小鼠的關節炎評分顯著降低，體重恢復更快，且關節破壞程度明顯減輕。影像學和組織學分析表明，MSCs-MVs治療減少了關節軟骨的降解和骨破壞。此外，ELISA和流式細胞術結果顯示，MSCs-MVs治療降低了小鼠血清中IL-1β、TNFα和IL-6等炎癥因子的水平，并調節了T細胞和B細胞的免疫應答。

體外實驗結果也支持了MSCs-MVs對軟骨細胞的保護作用。與未處理的軟骨細胞相比，與MSCs-MVs共培養的軟骨細胞在炎癥因子刺激下表現出更低的炎癥因子和軟骨降解標志物表達水平。同時，MSCs-MVs還促進了軟骨細胞的增殖和遷移，并減少了細胞凋亡。

在實驗方法中，Chondrex品牌產品（如膠原蛋白和佐劑）的使用對于建立穩定的CIA模型至關重要。CIA模型是RA研究中廣泛使用的動物模型，能夠模擬RA的慢性系統性炎癥、滑膜增生、單核細胞浸潤、軟骨降解和骨破壞等病理特征。使用高質量的膠原產品可以確保CIA模型的一致性和可靠性，從而提高實驗結果的準確性和可重復性。