我們提供最全面的RNA甲基化研究產(chǎn)品，涵蓋實(shí)驗(yàn)流程的每一步，從上游到下游。借助EpigenTek的RNA甲基化產(chǎn)品系列，拓展您對(duì)RNA的理解 

什么是RNA甲基化？

RNA甲基化是一種RNA的轉(zhuǎn)錄后修飾，它通過(guò)改變基因調(diào)控而不改變結(jié)構(gòu)基因序列來(lái)發(fā)揮作用。這種修飾在包括病毒在內(nèi)的眾多生物物種中都有發(fā)現(xiàn)，并與重要的生物學(xué)過(guò)程密切相關(guān)。與DNA甲基化類(lèi)似，RNA甲基化是可逆的，在生命中廣泛存在，主要涉及甲基基團(tuán)的添加。然而，RNA甲基化在不同類(lèi)型的RNA中的分布并不均勻。RNA甲基化發(fā)生在tRNA、rRNA、mRNA、tmRNA、snRNA、snoRNA、miRNA和病毒RNA中。mRNA上較為熟悉的兩種修飾包括N6-甲基腺苷（m6A）和5-甲基胞嘧啶（5mC）。 

在所有化學(xué)上不同的RNA修飾中，N6-甲基腺苷（m6A）是最常見(jiàn)的。它涉及腺苷堿基在氮-6位的甲基化。通常被稱(chēng)為“第五RNA堿基”，m6A占真核生物中所有RNA甲基化的80%以上。特別是，這種RNA修飾被認(rèn)為對(duì)mRNA調(diào)控很重要，因?yàn)閙6A在3'非翻譯區(qū)（3'UTR）富集。此外，它還與多種癌癥相關(guān)，包括白血病、乳腺癌和前列腺癌。  

另一種在各種RNA分子中發(fā)現(xiàn)的豐富的表觀遺傳標(biāo)記是5-甲基胞嘧啶（5mC），它涉及在5-碳環(huán)上添加甲基基團(tuán)。據(jù)報(bào)道，5mC存在于多種不同的RNA類(lèi)型中，包括rRNA、tRNA、eRNA以及mRNA和各種非編碼RNA。檢測(cè)RNA中5mC修飾的最理想方法是通過(guò)亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化后進(jìn)行高通量測(cè)序。  

哪種RNA甲基化工具適合您的實(shí)驗(yàn)？

RNA修飾，尤其是RNA甲基化的重要性是顯而易見(jiàn)的。然而，RNA甲基化研究領(lǐng)域仍處于起步階段。許多已建立的檢測(cè)方法嚴(yán)重依賴于抗體依賴的轉(zhuǎn)錄組范圍技術(shù)，其中大多數(shù)集中在RNA中m6A的發(fā)生上，因?yàn)槠渖飳W(xué)作用已被廣泛研究。5mC RNA檢測(cè)技術(shù)，包括亞硫酸氫鹽測(cè)序，也引起了關(guān)注，因?yàn)?mC RNA與多種細(xì)胞過(guò)程和腫瘤發(fā)生有關(guān)。新的生化方法與高通量測(cè)序相結(jié)合，使得研究整個(gè)轉(zhuǎn)錄組以及繪制單個(gè)修飾成為可能，揭示RNA修飾酶或蛋白質(zhì)結(jié)合因子的真正功能。 

在開(kāi)始您的RNA甲基化研究項(xiàng)目之前，我們建議回顧與您計(jì)劃實(shí)驗(yàn)相關(guān)的任何可用文獻(xiàn)。如果其他研究人員進(jìn)行了類(lèi)似的工作，您應(yīng)該利用他們的信息，并將其作為您研究的基礎(chǔ)，仔細(xì)審查以避免潛在的障礙。 

如果您希望分析RNA中m6A或5mC修飾的全局水平，我們建議從對(duì)樣本中甲基化狀態(tài)的簡(jiǎn)單預(yù)篩查開(kāi)始。這些方法可通過(guò)我們的熱門(mén)產(chǎn)品——m6A RNA甲基化定量試劑盒和5-mC RNA甲基化ELISA試劑盒實(shí)現(xiàn)。對(duì)于直接靶向m6A或5mC，我們建議使用我們的m6A富集試劑盒或亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒。 

訪問(wèn)我們的RNA甲基化資源中心，獲取更多關(guān)于RNA甲基化的有用信息。為了方便您了解我們的產(chǎn)品，我們還詳細(xì)介紹了RNA甲基化產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)。對(duì)于涉及病毒和宿主RNA修飾的研究，請(qǐng)?jiān)L問(wèn)我們的表觀遺傳病毒RNA修飾工作流程頁(yè)面。  

RNA甲基化研究步驟詳細(xì)信息

1. RNA分離提取

RNA分離是任何RNA甲基化研究的關(guān)鍵第一步。我們的RNA制備試劑盒能夠在短時(shí)間內(nèi)高效分離來(lái)自組織、培養(yǎng)細(xì)胞和無(wú)細(xì)胞液體樣本（特別是唾液和鼻咽拭子）的總RNA。純化的RNA可用于多種常規(guī)應(yīng)用，如RT-PCR、cDNA合成、Northern blot、差異顯示、引物延伸和mRNA選擇。

查看更多提取試劑盒：點(diǎn)擊鏈接 

2. 整體m6A和5mC RNA定量

EpigenTek的m6A和5mC RNA甲基化試劑盒使研究人員能夠輕松確定RNA甲基化如何影響他們的研究項(xiàng)目。我們的試劑盒可以直接定量N6-甲基腺苷（m6A）或測(cè)量任何物種（包括哺乳動(dòng)物、植物、真菌、細(xì)菌和病毒）分離的總RNA中的5-mC。

3. RNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化和cDNA合成

亞硫酸氫鹽處理技術(shù)，也稱(chēng)為亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，是準(zhǔn)備RNA進(jìn)行特異性甲基化分析的理想方法。該過(guò)程將胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，可通過(guò)高通量測(cè)序輕松區(qū)分。亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化后的RNA還可用于生成cDNA，用于分析甲基化狀態(tài)的各種下游應(yīng)用。

4. NGS文庫(kù)準(zhǔn)備

文庫(kù)準(zhǔn)備是下一代測(cè)序（NGS）的關(guān)鍵步驟。我們?yōu)镹GS提供了許多經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的解決方案，包括方便地從難以處理的樣本中構(gòu)建高質(zhì)量的RNA/DNA文庫(kù)，可用于各種基于Illumina的平臺(tái)。

5. MeRIP和m6A-Seq分析

使用我們的CUT&RUN RNA m6A富集試劑盒獲得m6A RNA的高分辨率圖譜。憑借獨(dú)特的核酸酶混合物，這些試劑盒僅分離抗體結(jié)合位置的RNA片段，并同時(shí)切割/去除目標(biāo)區(qū)域下方的RNA序列片段。我們的試劑盒可以從低輸入量的RNA中富集含有m6A修飾的RNA片段，非特異性背景水平極低。CUT&RUN RNA m6A-Seq試劑盒還包括文庫(kù)準(zhǔn)備步驟，作為額外優(yōu)勢(shì)。

6. 研究RNA甲基化的抗體

N6-甲基腺苷（m6A）是真核生物中RNA分子中最常見(jiàn)和最豐富的修飾之一。m6A的化學(xué)性質(zhì)使其難以區(qū)分，因此分析這種修飾的方法高度依賴于抗m6A抗體的質(zhì)量。我們的多克隆和單克隆m6A抗體可用于特異性檢測(cè)RNA中的m6A。它們經(jīng)過(guò)嚴(yán)格測(cè)試，保證在各自的應(yīng)用中有效。

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