在許多生物學(xué)應(yīng)用中，我們都需要對微量的雙鏈DNA（dsDNA）進行定量 例如：cDNA文庫構(gòu)建、亞克隆的DNA片段的純化、定量DNA擴增產(chǎn)物在藥物分子種的殘留等。常規(guī)檢測核酸濃度的方法是吸光度法，即檢測核酸在260nm ( A260 )處的光吸收，吸光度法的弊端是樣本中的單鏈核苷酸和單體核苷酸會產(chǎn)生干擾信號，樣品中的雜質(zhì)也會影響結(jié)果。吸光法無法區(qū)分DNA和RNA, 靈敏度也相對較低(用1cm的比色杯在A260值為0.1時相對應(yīng)的雙鏈DNA濃度為5ug/ml )。

 

今天給大家?guī)硪豢顭晒夥p鏈DNA檢測工具—Pico488 dsDNA 定量試劑盒（貨號：B1102），Pico488是一種極為靈敏的熒光核酸染料，常用于雙鏈DNA的定量檢測。歷來DNA濃度的測定在cDNA文庫的構(gòu)建，DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物的估測等領(lǐng)域中具有重要意義，疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測更是直接關(guān)系到人類的健康。

 

Pico488僅在與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測低至pg級別的dsDNA。該分析在三個數(shù)量級范圍內(nèi)呈線性，且?guī)缀鯚o序列依賴性，可以精確地測量多個來源的DNA，包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產(chǎn)物，可用熒光分光光度計或熒光酶標(biāo)儀讀數(shù)，Ex/Em=503nm/525nm。

 

Pico488 dsDNA 定量試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢：

相比傳統(tǒng)的方法，如紫外吸光法（A260）、探針雜交法、Hoechst 33258染料法等，Pico488 dsDNA 定量具有以下優(yōu)勢：

①靈敏度高：數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感，檢測范圍為：1pg/ul–5ng/ul，可節(jié)省寶貴的樣品；

②特異性強：在等摩爾的RNA存在的條件下，對dsDNA具有特異性；

③耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA；

④易于使用：只需在樣品中加入染料，等待5分鐘，然后讀數(shù)即可，且適用于24和96孔板；與市面上的大多數(shù)熒光酶標(biāo)儀和熒光計兼容；

⑤適用范圍廣：可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。

 

產(chǎn)品應(yīng)用：

測定微量的DNA殘留（如疫苗生產(chǎn)）；對DNA樣品進行精確定量

Pico488 dsDNA 定量試劑盒適用檢測設(shè)備及建議上樣量：

檢測設(shè)備類型		測定體積	Pico488染料工作液體積	DNA樣本量
比色皿熒光計	標(biāo)準(zhǔn)熒光比色皿 (3.5 mL)	2 ml	1 ml	1 ml
	其他熒光比色皿	比色皿體積75%	比色皿體積的37.5%	比色皿體積的37.5%
平板熒光計	96 孔板，每孔	0.2 ml	0.1 ml	0.1 ml
	24 孔板，每孔	1 ml	0.5 ml	0.5 ml
	其他規(guī)格的板子	孔體積的75%	孔體積的75%	孔體積的75%
NanoDrop 3300*		0.1 ml	0.05 ml	0.05 ml

* 為了保持測量的準(zhǔn)確性和精度，我們建議避免移液體積小于2ul。

 

Pico488 dsDNA 定量試劑盒檢測結(jié)果展示：

Pico488光譜信息

Pico488染料特異性針對于dsDNA

試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線

引用文獻賞析

1.Caza, F.; Granger Joly de Boissel, P.; Villemur, R.; Betoulle, S.; St-Pierre, Y. Liquid biopsies for omics-based analysis in sentinel mussels. PLoS One, 2019, 14(10), e0223525. doi: 10.1371/journal.pone.0223525

2.Crupi, A.N.; Nunnelee, J.S.; Taylor, D.J.; Thomas, A.; Vit, J.-P.; Riera, C.E.; Gottlieb, R.A.; Goodridge, H.S. Oxidative muscles have better mitochondrial homeostasis than glycolytic muscles throughout life and maintain mitochondrial function during aging. Aging, 2018, 10(11), 3327–3352. doi: 10.18632/aging.101643

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