文獻(xiàn)標(biāo)題：SGLT-2 inhibition by empagliflozin has no effect on experimental arterial thrombosis in a murine model of low-grade inflammation

DOI：https://doi.org/10.1093/cvr/cvac126

研究背景：

研究背景是動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病（ASCVD）與多種因素相關(guān)，包括年齡、糖尿病和肥胖等，是全球發(fā)病率和死亡率的主要原因。慢性低度炎癥被認(rèn)為是將肥胖誘導(dǎo)的代謝紊亂與胰島素抵抗聯(lián)系起來的關(guān)鍵介質(zhì)，并在這些患者中ASCVD的高發(fā)病率中起著機(jī)制性作用。鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（SGLT-2）主要在腎小管近曲小管中表達(dá)，控制葡萄糖重吸收回循環(huán)，因此SGLT-2的藥物阻斷可導(dǎo)致血糖降低，是一種高效的抗糖尿病療法。大量實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，SGLT-2抑制劑除了控制血糖外，還可能通過調(diào)節(jié)動(dòng)脈內(nèi)皮的激活和改善內(nèi)皮功能障礙來發(fā)揮“非靶向”效應(yīng)，從而減緩動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的演變。恩格列凈（empagliflozin）是SGLT-2抑制劑中對(duì)SGLT-2選擇性最高的藥物之一，已被證明可改善已確診ASCVD的糖尿病患者的CV預(yù)后，可能涉及多種超出血糖控制的機(jī)制。然而，恩格列凈對(duì)急性動(dòng)脈血栓形成事件的影響尚不清楚，尤其是在持續(xù)低度炎癥狀態(tài)下，這通常發(fā)生在代謝紊亂狀態(tài)中。因此，本研究旨在測(cè)試恩格列凈是否會(huì)影響基線（BSL）條件下或低度炎癥狀態(tài)下的動(dòng)脈血栓形成，這是ASCVD患者共有的系統(tǒng)環(huán)境。 

研究方法：

1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：使用16周齡的C57BL/6小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分為兩組，一組接受恩格列凈（25 mg/kg體重）的急性給藥，另一組接受對(duì)照劑。其中一部分小鼠在誘導(dǎo)頸動(dòng)脈血栓形成前，先用超低劑量的脂多糖（LPS；5 ng/kg體重）每?jī)芍芴幚硪淮危掷m(xù)4周，以誘導(dǎo)慢性低度炎癥狀態(tài)。

2. 頸動(dòng)脈血栓形成模型：通過光化學(xué)損傷頸動(dòng)脈來誘導(dǎo)動(dòng)脈血栓形成，使用多普勒血流探頭監(jiān)測(cè)血流變化，記錄血流阻斷時(shí)間。

3. 體外血小板聚集實(shí)驗(yàn)：從麻醉后的小鼠心臟穿刺取血，分離洗滌血小板，用膠原和凝血酶激活血小板，通過光透射聚集儀測(cè)定血小板聚集的最大聚集率、聚集速率和聚集滯后期。

4. 組織因子活性和表達(dá)測(cè)定：將頸動(dòng)脈組織裂解，測(cè)定組織因子活性，并通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定組織因子在動(dòng)脈組織中的表達(dá)。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：培養(yǎng)人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（HAECs），用LPS預(yù)處理后，再用不同濃度的恩格列凈處理，測(cè)定細(xì)胞裂解物中的組織因子活性和組織因子及PAI-1的表達(dá)。

6. 臨床研究：將44名2型糖尿病合并ASCVD或高CV風(fēng)險(xiǎn)的患者隨機(jī)分配到接受10 mg恩格列凈或匹配安慰劑的每日治療組，持續(xù)3個(gè)月，評(píng)估治療前后的血漿TF和PAI-1水平。

研究?jī)?nèi)容：

研究恩格列凈在基線條件和慢性低度炎癥狀態(tài)下對(duì)動(dòng)脈血栓形成的影響。評(píng)估恩格列凈對(duì)血小板數(shù)量、體積、激活狀態(tài)以及對(duì)膠原和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集的影響。同時(shí)，檢測(cè)恩格列凈對(duì)組織因子活性和表達(dá)、PAI-1表達(dá)以及血漿D-二聚體水平的影響。在2型糖尿病合并ASCVD或高CV風(fēng)險(xiǎn)的患者中，評(píng)估恩格列凈治療對(duì)血漿TF和PAI-1水平的影響。

研究結(jié)果：

1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

動(dòng)脈血栓形成：恩格列凈對(duì)動(dòng)脈血栓形成的影響與對(duì)照劑相當(dāng)，無論是在基線條件下還是在慢性低度炎癥狀態(tài)下，兩組間血流阻斷時(shí)間的差異均在預(yù)設(shè)的等效性范圍內(nèi)。

血小板功能：恩格列凈對(duì)血小板數(shù)量、體積沒有影響，且對(duì)膠原和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集反應(yīng)（包括最大聚集率、聚集速率和聚集滯后期）也沒有改變。

凝血因子：恩格列凈對(duì)組織因子活性和表達(dá)、PAI-1表達(dá)以及血漿D-二聚體水平均無影響，提示恩格列凈對(duì)凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)和纖溶活性沒有影響。

2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果

內(nèi)皮細(xì)胞中的組織因子活性和PAI-1表達(dá)：恩格列凈對(duì)LPS預(yù)處理的人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中的組織因子活性和PAI-1表達(dá)沒有影響。

3. 臨床研究結(jié)果

血漿TF和PAI-1水平：在2型糖尿病合并ASCVD或高CV風(fēng)險(xiǎn)的患者中，恩格列凈治療3個(gè)月后，血漿TF和PAI-1水平?jīng)]有變化。

血糖水平：恩格列凈治療顯著降低了患者的血漿血糖水平。

在文獻(xiàn)中，Mouse D-Dimer ELISA Kit（貨號(hào)abx258705） 的主要應(yīng)用是用于定量檢測(cè)小鼠樣本中的 D-Dimer 水平。D-Dimer 是纖維蛋白降解產(chǎn)物，其水平的變化可以反映體內(nèi)纖溶系統(tǒng)的活性。因此，該試劑盒在研究中用于評(píng)估實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的纖溶活性和凝血狀態(tài)，尤其是在涉及血栓形成和溶解的研究中。

Mouse D-Dimer ELISA Kit 的主要應(yīng)用還包括：

血栓性疾病的研究：用于檢測(cè)小鼠樣本中的 D-Dimer 水平，以研究血栓形成和溶解的過程。

彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）的診斷：D-Dimer 是 DIC 的重要生物標(biāo)志物，該試劑盒可用于輔助診斷 DIC。

纖溶系統(tǒng)疾病的研究：用于評(píng)估與纖溶系統(tǒng)相關(guān)的疾病狀態(tài)，如妊娠綜合癥等。

溶栓治療的監(jiān)測(cè)：在溶栓治療過程中，監(jiān)測(cè) D-Dimer 水平可以幫助評(píng)估治療效果。

炎癥相關(guān)研究：D-Dimer 水平的變化與炎癥狀態(tài)有關(guān)，該試劑盒可用于研究炎癥對(duì)纖溶系統(tǒng)的影響。