由于環(huán)境因素和細(xì)胞內(nèi)正常的新陳代謝過程，DNA損傷每天以每個細(xì)胞1000到100萬個分子損傷的速度發(fā)生。雖然這只占人類基因組約60億個堿基(30億個堿基對)的一小部分，但關(guān)鍵基因的未修復(fù)損傷可能會阻礙細(xì)胞發(fā)揮其功能的能力，并顯著增加癌癥的可能性。

       彗星實(shí)驗(yàn)（Comet assay）也被稱為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一種超靈敏的單細(xì)胞水平上檢測DNA損傷的技術(shù)，可以檢測到1.657×10^-15中0.1個DNA的斷裂,甚至檢出自然光照射體外淋巴細(xì)胞1h后引起的DNA損傷。在電泳場下，損傷的細(xì)胞DNA(包含碎片和鏈斷裂)從完整的DNA中分離出來，在顯微鏡下形成典型的“彗星尾巴”形狀。DNA損傷的程度通常是通過測量彗星尾巴來目測的，也可以使用圖像分析軟件來測量各種參數(shù)。

      【彗星分析應(yīng)用領(lǐng)域】：主要還是在細(xì)胞凋亡的研究，腫瘤/癌癥研究，毒理學(xué)研究，環(huán)境污染監(jiān)測，臨床診斷與治療監(jiān)測。

      下面就由小艾為您分享一下彗星分析實(shí)驗(yàn)（Comet assay）怎么做？

      《》First，選擇專業(yè)的彗星分析試劑盒：OxiSelect™ Comet Assay Kit

      根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)用量，可以選擇不同規(guī)格的產(chǎn)品：

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	說明
Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片) （最常用）	STA-350	15 assays（5片）
	STA-351	75 assays（25片）
	STA-351-5	5*75 assays（5*25片）
Comet Assay Kits, 96-Well（96孔玻片） （高通量篩選）	STA-355	96 assays（1片）
	STA-355-5	5*96 assays（5片）

      * 每個玻片表面都經(jīng)過特殊處理，一旦電泳過，即使玻片上有未使用的孔，也不能用于第二次實(shí)驗(yàn)。

      * 3孔和96孔玻片，均可以單獨(dú)購買，請咨詢艾美捷科技。

      艾美捷向您推薦Comet Assay kit彗星分析試劑盒內(nèi)提供了彗星分析所需的所有必需試劑，包括裂解液、彗星分析低熔點(diǎn)凝膠、DNA熒光染料、彗星分析玻片以及其它試劑。助您輕松完成彗星實(shí)驗(yàn)分析。

      【英文說明書】下載 后仔細(xì)閱讀哦~

      *（中文版說明書，已安排翻譯中，敬請期待）

      【2020年最新發(fā)表文章】

      Siemionow, M. et al. (2020). Transplantation of Dystrophin Expressing Chimeric (DEC) Human Cells of Myoblast/MSC Origin Improves Function in Duchenne Muscular Dystrophy Model. Stem Cells Dev. doi: 10.1089/scd.2020.0161.

      Lammert, C.R. et al. (2020). AIM2 inflammasome surveillance of DNA damage shapes neurodevelopment. Nature. doi: 10.1038/s41586-020-2174-3.

      Shibayama, Y. et al. (2020). Aberrant (pro)renin receptor expression induces genomic instability in pancreatic ductal adenocarcinoma through upregulation of SMARCA5/SNF2H. Commun Biol. 3(1):724. doi: 10.1038/s42003-020-01434-x.

      Han, J. et al. (2020). Elevated CXorf67 Expression in PFA Ependymomas Suppresses DNA Repair and Sensitizes to PARP Inhibitors. Cancer Cell. doi: 10.1016/j.ccell.2020.10.009.

      Hays, E. et al. (2020). The SWI/SNF ATPase BRG1 stimulates DNA end resection and homologous recombination by reducing nucleosome density at DNA double strand breaks and by promoting the recruitment of the CtIP nuclease. Cell Cycle. doi: 10.1080/15384101.2020.1831256.

      Ibnu Rasid, E.N. et al. (2020). Effect of Dioscorea hispida var. Daemona (Roxb) Prain & Burkill on Oxidative Stress and DNA Damage in the Liver of Pregnant Rats. Int J Biomed Sci. 16(3).

      Le, B.V. et al. (2020). TGFβR-SMAD3 Signaling Induces Resistance to PARP Inhibitors in the Bone Marrow Microenvironment. Cell Rep. 33(1):108221. doi: 10.1016/j.celrep.2020.108221.

      Klotz-Noack, K. et al. (2020). SFPQ Depletion Is Synthetically Lethal with BRAFV600E in Colorectal Cancer Cells. Cell Rep. 32(12):108184. doi: 10.1016/j.celrep.2020.108184.

      Ito, S.S. et al. (2020). Inhibition of the ATR kinase enhances 5-FU sensitivity independently of non-homologous end-joining and homologous recombination repair pathways. J Biol Chem. doi: 10.1074/jbc.RA120.013726.

      Klak, M. et al. (2020). Irradiation with 365 nm and 405 nm wavelength shows differences in DNA damage of swine pancreatic islets. PLoS One. 15(6):e0235052. doi: 10.1371/journal.pone.0235052.

      Khalil, A.M. et al. (2020).  Association between Mobile Phone Using and DNA Damage of Epithelial Cells of the Oral Mucosa. J Biotechnol Biomed. 3(2020): 50-66. doi: 10.26502/jbb.2642-91280027.

      Wang, Y. et al. (2020). Targeting therapeutic vulnerabilities with PARP inhibition and radiation in IDH-mutant gliomas and cholangiocarcinomas. Sci Adv. doi: 10.1126/sciadv.aaz3221.

      Fang, Y. et al. (2020). Epigenetic dysregulation of Mdr1b in the blood-testis barrier contributes to dyszoospermia in mice exposed to cadmium. Ecotoxicol Environ Saf. 190:110142. doi: 10.1016/j.ecoenv.2019.110142.

      《》Second, 彗星分析電泳模式選擇

      * 實(shí)驗(yàn)過程中的各類緩沖液都需要4℃預(yù)冷。

      關(guān)于電泳電壓：以上2種電泳模式，均推薦參考您實(shí)驗(yàn)室電泳槽兩極間的舉例，按照1V/cm的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置電壓。舉例，如果電泳槽兩極舉例是35cm，您需要使用35V的電壓來執(zhí)行電泳。

      實(shí)驗(yàn)環(huán)境：為避免紫外線對細(xì)胞樣品造成額外損害，請?jiān)谌豕鈼l件下進(jìn)行。

      《》Third，彗星分析的典型結(jié)果樣式

      如上圖，左側(cè)是健康的Jurkat細(xì)胞（未處理）；右側(cè)是使用20 uM Etoposide（依托泊苷）處理4小時的Jurkat細(xì)胞。【電泳條件：堿性電泳，15mins】

      說明書或者文獻(xiàn)中的結(jié)果數(shù)據(jù)是否可以作為我自己實(shí)驗(yàn)的參考結(jié)果呢？

      這是一個很好的問題，也是問得最多的問題。但與ELISA不同，Comet Assay不提供對照，因?yàn)槿魏蜟omet Assay的結(jié)果都將根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件而變化。 例如，如果電泳運(yùn)行條件不同，則包含相同數(shù)量DNA損傷的細(xì)胞的尾巴大小可能會不同。 與我們的結(jié)果或其他研究人員的結(jié)果進(jìn)行比較將毫無意義，因?yàn)閮烧咧g的條件永遠(yuǎn)不會相同。如果您有興趣測試化合物對DNA損傷的影響，建議使所有條件在實(shí)驗(yàn)之間保持一致，并使用相同的運(yùn)行時間和軟件進(jìn)行分析。

      《》Fourth，彗星分析結(jié)果計(jì)算

      通過測量細(xì)胞核遺傳物質(zhì)（“彗頭”）與產(chǎn)生的“尾巴”之間的位移，可以量化DNA損傷。 尾矩（Tail Moment）和尾巴DNA％（Tail DNA% ）是分析彗星分析結(jié)果的兩個最常見的參數(shù)。 每個樣品至少應(yīng)分析50 -100個細(xì)胞。考慮到遺傳物質(zhì)的遷移以及尾巴中DNA的相對數(shù)量，通常建議使用尾矩作為評估DNA損傷的指標(biāo)。

	Tail DNA% = 100 x Tail DNA 熒光強(qiáng)度/整個Cell DNA 熒光強(qiáng)度
	尾矩（Tail Moment ）可以使用以下方法之一進(jìn)行測量：
	1. 橄欖尾矩（Olive Tail Moment）= Tail DNA% x Tail Monent Length （頭中心與尾中心之間的長度）【左圖下】
	2. 延伸尾矩（Extent Tail Moment） = Tail DNA% x Length of Tail【左圖上】
	建議使用軟件的推薦參數(shù)進(jìn)行測量

      有沒有配套的彗星實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析軟件呢？

      這個還真有，小艾查閱了產(chǎn)品說明書，引用文獻(xiàn)，已經(jīng)彗星分析相關(guān)的發(fā)表文章，發(fā)現(xiàn)有如下3種主流的軟件可用（均有文獻(xiàn)）。根據(jù)您的經(jīng)驗(yàn)和需求進(jìn)行選擇。

      *很遺憾，小艾也沒有親自做過此類實(shí)驗(yàn)，所以每次有小伙伴求指導(dǎo)的時候，我們也很為難，為了避免誤導(dǎo)，只能盡力提供相關(guān)資料給您閱讀了。

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