由于環(huán)境因素和細(xì)胞內(nèi)正常的新陳代謝過程，DNA損傷每天以每個細(xì)胞1000到100萬個分子損傷的速度發(fā)生。雖然這只占人類基因組約60億個堿基(30億個堿基對)的一小部分，但關(guān)鍵基因的未修復(fù)損傷可能會阻礙細(xì)胞發(fā)揮其功能的能力，并顯著增加癌癥的可能性。

       彗星實(shí)驗(yàn)（Comet assay）也被稱為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一種超靈敏的單細(xì)胞水平上檢測DNA損傷的技術(shù)，可以檢測到1.657×10^-15中0.1個DNA的斷裂,甚至檢出自然光照射體外淋巴細(xì)胞1h后引起的DNA損傷。在電泳場下，損傷的細(xì)胞DNA(包含碎片和鏈斷裂)從完整的DNA中分離出來，在顯微鏡下形成典型的“彗星尾巴”形狀。DNA損傷的程度通常是通過測量彗星尾巴來目測的，也可以使用圖像分析軟件來測量各種參數(shù)。

      【彗星分析應(yīng)用領(lǐng)域】：主要還是在細(xì)胞凋亡的研究，腫瘤/癌癥研究，毒理學(xué)研究，環(huán)境污染監(jiān)測，臨床診斷與治療監(jiān)測。

      下面就由小艾為您分享一下彗星分析實(shí)驗(yàn)（Comet assay）怎么做？

      《》First，選擇專業(yè)的彗星分析試劑盒：OxiSelect™ Comet Assay Kit

      根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)用量，可以選擇不同規(guī)格的產(chǎn)品：

  * 每個玻片表面都經(jīng)過特殊處理，一旦電泳過，即使玻片上有未使用的孔，也不能用于第二次實(shí)驗(yàn)。

      * 3孔和96孔玻片，均可以單獨(dú)購買，請咨詢艾美捷科技。

      艾美捷向您推薦Comet Assay kit彗星分析試劑盒內(nèi)提供了彗星分析所需的所有必需試劑，包括裂解液、彗星分析低熔點(diǎn)凝膠、DNA熒光染料、彗星分析玻片以及其它試劑。助您輕松完成彗星實(shí)驗(yàn)分析。

      【英文說明書】下載 后仔細(xì)閱讀哦~

      *（中文版說明書，已安排翻譯中，敬請期待）

      》Second, 彗星分析電泳模式選擇

      * 實(shí)驗(yàn)過程中的各類緩沖液都需要4℃預(yù)冷。

      關(guān)于電泳電壓：以上2種電泳模式，均推薦參考您實(shí)驗(yàn)室電泳槽兩極間的舉例，按照1V/cm的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置電壓。舉例，如果電泳槽兩極舉例是35cm，您需要使用35V的電壓來執(zhí)行電泳。

      實(shí)驗(yàn)環(huán)境：為避免紫外線對細(xì)胞樣品造成額外損害，請?jiān)谌豕鈼l件下進(jìn)行。

      說明書或者文獻(xiàn)中的結(jié)果數(shù)據(jù)是否可以作為我自己實(shí)驗(yàn)的參考結(jié)果呢？

      這是一個很好的問題，也是問得最多的問題。但與ELISA不同，Comet Assay不提供對照，因?yàn)槿魏蜟omet Assay的結(jié)果都將根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件而變化。 例如，如果電泳運(yùn)行條件不同，則包含相同數(shù)量DNA損傷的細(xì)胞的尾巴大小可能會不同。 與我們的結(jié)果或其他研究人員的結(jié)果進(jìn)行比較將毫無意義，因?yàn)閮烧咧g的條件永遠(yuǎn)不會相同。如果您有興趣測試化合物對DNA損傷的影響，建議使所有條件在實(shí)驗(yàn)之間保持一致，并使用相同的運(yùn)行時間和軟件進(jìn)行分析。

      》Fourth，彗星分析結(jié)果計算

      通過測量細(xì)胞核遺傳物質(zhì)（“彗頭”）與產(chǎn)生的“尾巴”之間的位移，可以量化DNA損傷。 尾矩（Tail Moment）和尾巴DNA％（Tail DNA% ）是分析彗星分析結(jié)果的兩個最常見的參數(shù)。 每個樣品至少應(yīng)分析50 -100個細(xì)胞。考慮到遺傳物質(zhì)的遷移以及尾巴中DNA的相對數(shù)量，通常建議使用尾矩作為評估DNA損傷的指標(biāo)。

      有沒有配套的彗星實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析軟件呢？

      這個還真有，小艾查閱了產(chǎn)品說明書，引用文獻(xiàn)，已經(jīng)彗星分析相關(guān)的發(fā)表文章，發(fā)現(xiàn)有如下3種主流的軟件可用（均有文獻(xiàn)）。根據(jù)您的經(jīng)驗(yàn)和需求進(jìn)行選擇。

      *很遺憾，小艾也沒有親自做過此類實(shí)驗(yàn)，所以每次有小伙伴求指導(dǎo)的時候，我們也很為難，為了避免誤導(dǎo)，只能盡力提供相關(guān)資料給您閱讀了。

      作為一家具有高端的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)，總部位于武漢光谷高新技術(shù)開發(fā)區(qū)，服務(wù)面向全國。艾美捷科技是集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，為用戶提供專業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品、整合的解決方案，及優(yōu)質(zhì)的物流服務(wù)。為了更好的服務(wù)客戶，公司組建了一支經(jīng)驗(yàn)豐富的研發(fā)團(tuán)隊(duì)-艾美捷生物技術(shù)中心，進(jìn)入研發(fā)生產(chǎn)階段，將更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品推薦給國內(nèi)生物領(lǐng)域的同仁們!