核因子E2相關(guān)因子（Nrf2）是一種轉(zhuǎn)錄因子，通過結(jié)合其啟動(dòng)子區(qū)域的ARE（抗氧化反應(yīng)元件）來增加抗氧化蛋白的表達(dá)，從而協(xié)調(diào)抗氧化和抗炎反應(yīng)。在基礎(chǔ)條件下，Nrf2被細(xì)胞骨架中的Keap1（一種E3泛素連接酶復(fù)合體的底物識(shí)別亞基）錨定在細(xì)胞質(zhì)中，該復(fù)合體靶向Nrf2使其降解。當(dāng)細(xì)胞暴露于氧化應(yīng)激時(shí)，Nrf2從Keap1中釋放出來。Nrf2轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中，與ARE結(jié)合并誘導(dǎo)抗氧化蛋白和II相蛋白的表達(dá)，從而保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。Nrf2和Keap1都是極具吸引力的治療靶點(diǎn)。

Keap1:Nrf2抑制劑篩選檢測試劑盒旨在通過熒光偏振（FP）技術(shù)識(shí)別Keap1:Nrf2結(jié)合的抑制劑。熒光偏振是一種強(qiáng)大的工具，通過監(jiān)測熒光標(biāo)記分子與其結(jié)合伙伴結(jié)合時(shí)旋轉(zhuǎn)流動(dòng)性的變化來研究分子間相互作用。為了確定抑制劑對(duì)Keap1:Nrf2復(fù)合物形成的影響，將Keap1蛋白和熒光標(biāo)記的Nrf2肽在有或沒有測試抑制劑的情況下孵育30分鐘。使用能夠測量熒光偏振的孔板讀取器來測量Nrf2肽旋轉(zhuǎn)流動(dòng)性的變化。

艾美捷BPS Bioscience-KEAP1-Nrf2抑制劑篩選檢測試劑盒:

貨號(hào)：72020

同義詞：Kelch樣ECH結(jié)合蛋白1、Nrf2的細(xì)胞質(zhì)抑制劑、INRF2、Kelch樣蛋白19、KIAA0132、KLHL19

試劑盒格式：熒光偏振

適用物種：人

靶點(diǎn)：KEAP1

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性：

按照指示儲(chǔ)存時(shí)，該檢測試劑盒在收到之日起6個(gè)月內(nèi)表現(xiàn)最佳。

應(yīng)用：研究酶動(dòng)力學(xué)。

篩選小分子抑制劑，用于藥物發(fā)現(xiàn)和高通量應(yīng)用。

運(yùn)輸溫度：-80℃

所需材料但未提供

可調(diào)節(jié)微量移液器及無菌吸頭

能夠進(jìn)行熒光偏振測量的孔板讀取器，λex = 475-495 nm，λem = 518-538 nm

驗(yàn)證數(shù)據(jù)：

圖：左側(cè)：Keap1與Nrf2的結(jié)合。右側(cè)：Nrf2抑制劑對(duì)Keap1:Nrf2結(jié)合的抑制作用。

使用Keap1:Nrf2抑制劑篩選檢測試劑盒（BPS Bioscience #72020）測量結(jié)合。Nrf2抑制劑KI696（Medchem Express #HY-101140）與Nrf2肽和Keap1在不同濃度下孵育。使用Bio-Tek熒光微孔板讀取器在λex 485nm、λem 530nm處測量熒光偏振。

文獻(xiàn)參考：

Inoyama, D., et al. 2012. J. Biomol. Screening 17(4): 435-447