PARP1（聚ADP-核糖聚合酶1）是PARP家族中含量最豐富、研究最深入的成員，在DNA損傷修復(fù)（DDR）、炎癥反應(yīng)及多種疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。PARP1通過催化ADP-核糖基化（即向靶蛋白添加ADP-核糖單元）參與DNA單鏈斷裂的修復(fù)，其介導(dǎo)的聚ADP-核糖基化（PARylation）可形成線性或分支的ADP-核糖鏈，進(jìn)而招募修復(fù)因子完成損傷修復(fù)。然而，PARP1的異常高表達(dá)與乳腺癌、結(jié)腸癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等惡性腫瘤密切相關(guān)，其過度激活會(huì)促進(jìn)易錯(cuò)的微同源介導(dǎo)的末端連接（MMEJ）修復(fù)途徑，導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定性并推動(dòng)腫瘤演進(jìn)。此外，PARP1還參與炎癥及I型糖尿病的病理過程。基于PARP1的抑制劑已在臨床上成功用于BRCA1/BRCA2缺陷型腫瘤的治療，通過合成致死效應(yīng)選擇性殺傷癌細(xì)胞。

為滿足科研人員在PARP1酶活性檢測(cè)、抑制劑篩選及藥物發(fā)現(xiàn)中的需求，由艾美捷代理BPS Bioscience 公司推出的 PARP1 Chemiluminescent Assay Kit（貨號(hào)：80551）提供了一套完整、靈敏、高通量兼容的解決方案。該試劑盒以96孔板格式為基礎(chǔ)，包含純化的重組人PARP1酶、反應(yīng)底物及優(yōu)化緩沖液，支持100次酶反應(yīng)，適用于酶動(dòng)力學(xué)研究及小分子抑制劑的篩選與表征。

圖1. PARP1化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒示意圖。

組蛋白被涂覆在96孔板上。接下來，在優(yōu)化的檢測(cè)緩沖液中，將生物素化的NAD+混合物（稱為PARP底物混合物）與PARP1酶和活化的DNA模板一起孵育。然后，用鏈霉親和素-HRP處理板，再加入ELISA ECL底物以產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，該化學(xué)發(fā)光可使用化學(xué)發(fā)光讀數(shù)儀進(jìn)行測(cè)量。化學(xué)發(fā)光信號(hào)與PARP1活性成正比。

一、試劑盒核心組分與設(shè)計(jì)優(yōu)勢(shì)

1. 即用型組分，操作高效

試劑盒提供所有必需成分：重組PARP1酶（人源）、反應(yīng)底物（包括組蛋白及NAD?）、PARP檢測(cè)緩沖液。用戶無需額外準(zhǔn)備酶或底物，即可直接開展實(shí)驗(yàn)。純化的重組PARP1保留了完整的酶活性，確保檢測(cè)結(jié)果具有高度的生物學(xué)相關(guān)性。

2. 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，靈敏度高

本試劑盒采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)PARP1的酶活性。其原理是將生物素化的底物與鏈霉親和素-HRP（辣根過氧化物酶）結(jié)合，通過HRP催化化學(xué)發(fā)光底物產(chǎn)生穩(wěn)定、高強(qiáng)度的發(fā)光信號(hào)。發(fā)光強(qiáng)度與PARP1催化的PARylation水平成正比，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)酶活性的精確定量。與熒光法相比，化學(xué)發(fā)光法不受化合物自發(fā)熒光干擾，背景更低，動(dòng)態(tài)范圍更寬，尤其適用于含有熒光化合物的篩選實(shí)驗(yàn)。

3. 96孔板格式，兼容HTS

試劑盒提供96孔板格式，并可與自動(dòng)化移液工作站無縫對(duì)接，實(shí)現(xiàn)高通量篩選（HTS）。用戶可在單次實(shí)驗(yàn)中完成數(shù)十至數(shù)百個(gè)化合物的初篩，快速識(shí)別具有PARP1抑制活性的先導(dǎo)化合物。對(duì)于需要更高通量的應(yīng)用，BPS Bioscience也提供384孔板版本的PARP1檢測(cè)試劑盒（需另行咨詢）。

4. 酶動(dòng)力學(xué)與抑制劑表征雙重應(yīng)用

利用試劑盒中的純化酶和底物，研究人員可以：

測(cè)定酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)：通過改變底物濃度，計(jì)算Km、Vmax等常數(shù)，比較不同突變體或不同條件下的催化效率。

計(jì)算抑制劑IC50：在固定酶和底物濃度下，加入梯度稀釋的待測(cè)化合物，擬合劑量-反應(yīng)曲線，獲得半數(shù)抑制濃度。

二、技術(shù)參數(shù)與操作要點(diǎn)

規(guī)格與儲(chǔ)存

檢測(cè)格式：化學(xué)發(fā)光（96孔板）。

物種：人源。

運(yùn)輸溫度：-80°C（干冰）。

穩(wěn)定性：按照指示儲(chǔ)存（各組分保存條件詳見說明書），試劑盒在收貨后6個(gè)月內(nèi)保持最佳性能。

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用（Research Use Only），不可用于臨床診斷。

注意事項(xiàng)

避免反復(fù)凍融：PARP1酶對(duì)溫度敏感，建議收到后分裝保存于-80°C，避免多次凍融導(dǎo)致活性下降。

底物兼容性：試劑盒中提供的底物已優(yōu)化，用戶無需額外添加組蛋白或DNA，但需注意不同批次間的活性差異。

陽性對(duì)照：建議使用已知PARP1抑制劑（如Olaparib、Rucaparib）作為陽性對(duì)照，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)體系的有效性。

三、應(yīng)用場(chǎng)景與科研價(jià)值

1. DNA損傷修復(fù)機(jī)制研究

PARP1是DNA單鏈斷裂修復(fù)的核心因子。利用該試劑盒，研究人員可以定量分析不同細(xì)胞裂解液或重組蛋白的PARP1活性，評(píng)估基因突變、翻譯后修飾或藥物處理對(duì)酶活的影響，從而深入揭示PARP1在非同源末端連接（NHEJ）、同源重組（HR）及核苷酸切除修復(fù)等通路中的調(diào)控機(jī)制。

2. 抗腫瘤藥物高通量篩選

PARP1抑制劑已成功用于BRCA突變型卵巢癌、乳腺癌等的臨床治療。然而，現(xiàn)有抑制劑存在耐藥性和毒副作用等問題，亟需開發(fā)新一代高效低毒的PARP1抑制劑。本試劑盒支持96/384孔板自動(dòng)化篩選，可快速評(píng)估數(shù)千個(gè)化合物對(duì)PARP1活性的抑制作用，并測(cè)定IC50值，加速藥物發(fā)現(xiàn)進(jìn)程。

3. 合成致死與聯(lián)合用藥研究

PARP1抑制劑在HR修復(fù)缺陷細(xì)胞（如BRCA1/2突變）中通過合成致死效應(yīng)發(fā)揮抗腫瘤作用。利用該試劑盒，研究人員可以聯(lián)合其他靶向藥物（如ATR抑制劑、WEE1抑制劑）進(jìn)行篩選，尋找能夠協(xié)同增強(qiáng)PARP1抑制劑療效的組合方案，為克服耐藥提供新策略。

4. 炎癥與代謝疾病研究

除DNA修復(fù)外，PARP1還參與炎癥因子表達(dá)和胰島β細(xì)胞功能調(diào)控。利用該試劑盒，可以評(píng)估抗炎藥物或代謝調(diào)節(jié)劑對(duì)PARP1活性的影響，為探索PARP1在I型糖尿病、神經(jīng)退行性疾病中的治療潛力提供工具。

四、文獻(xiàn)參考

Marques M., et al., 2019 Oncogene 38 (12): 2177-2191.