新生兒Fc受體（FcRn）是一種由FCGRT基因編碼的Fcγ受體與β2-微球蛋白（B2M）組成的異源二聚體蛋白。FcRn在超過25種組織中表達(dá)，脾臟和腸道中水平最高，其核心功能是結(jié)合并保護(hù)單體免疫球蛋白G（IgG），通過回收IgG并將其再循環(huán)至血液循環(huán)中，從而顯著延長(zhǎng)IgG的半衰期。此外，F(xiàn)cRn還參與血清白蛋白（HSA）的穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)。在胎盤組織中，F(xiàn)cRn介導(dǎo)母體IgG向胎兒的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，為新生兒提供被動(dòng)免疫。

FcRn的這一獨(dú)特生物學(xué)功能使其成為藥物開發(fā)的雙重靶點(diǎn)：一方面，通過工程化改造治療性抗體的Fc區(qū)以增強(qiáng)其對(duì)FcRn的親和力，可延長(zhǎng)抗體半衰期，提高藥效——例如用于治療COVID-19的抗體雞尾酒Evusheld以及TNF-α/Fc融合蛋白Enbrel，均利用了FcRn介導(dǎo)的再循環(huán)機(jī)制。另一方面，在自身免疫性疾病中，致病性自身抗體是疾病進(jìn)展的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素。阻斷FcRn與IgG的相互作用，可加速包括致病性自身抗體在內(nèi)的總IgG清除。基于這一策略，首個(gè)靶向FcRn的藥物efgartigimod已獲FDA批準(zhǔn)用于治療重癥肌無力，為這一治療路徑提供了概念驗(yàn)證。

為滿足研究人員在FcRn靶向藥物篩選中的需求，由艾美捷代理的BPS Bioscience 公司推出的 HSA:FcRn 中和抗體篩選化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：82151）提供了一套完整、靈敏、高通量兼容的解決方案。該試劑盒專門用于篩選和表征能夠阻斷人血清白蛋白（HSA）與人FcRn相互作用的中和抗體或阻斷劑，適用于自身免疫病治療藥物及半衰期延長(zhǎng)型抗體藥物的早期發(fā)現(xiàn)。

圖1：HSA:FcRn中和抗體篩選化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒工作原理示意圖。

一個(gè)96孔板或384孔板被FcRn蛋白包被。封閉后，用封閉劑或中和抗體對(duì)板進(jìn)行預(yù)孵育。隨后與生物素-HSA孵育，用鏈霉親和素-HRP處理板，然后加入ELISA ECL底物以產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，該化學(xué)發(fā)光可使用化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行測(cè)量。化學(xué)發(fā)光信號(hào)與HSA與FcRn的結(jié)合成比例。

一、試劑盒核心組分與設(shè)計(jì)優(yōu)勢(shì)

1. 即用型完整組分，操作簡(jiǎn)便

試劑盒提供所有必需成分：

生物素化人血清白蛋白（Biotinylated HSA）：作為配體。

重組人FcRn蛋白（FCGRT/B2M）：包含F(xiàn)CGRT的24-297位氨基酸及B2M的21-119位氨基酸，保留天然結(jié)合活性。

鏈霉親和素-辣根過氧化物酶（Streptavidin-HRP）：用于化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。

檢測(cè)緩沖液及洗滌緩沖液：優(yōu)化反應(yīng)條件，降低背景。

用戶無需額外準(zhǔn)備蛋白或酶，即可直接開展實(shí)驗(yàn)。

2. 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，高靈敏度與寬動(dòng)態(tài)范圍

本試劑盒采用化學(xué)發(fā)光ELISA原理：將FcRn蛋白包被于微孔板，加入生物素化HSA和待測(cè)中和抗體（或阻斷劑）。如果抗體能阻斷HSA與FcRn的結(jié)合，則后續(xù)結(jié)合的Streptavidin-HRP減少，化學(xué)發(fā)光信號(hào)降低。發(fā)光強(qiáng)度與HSA-FcRn結(jié)合程度成正比，與中和抗體的活性成反比。化學(xué)發(fā)光法具有背景低、信噪比高、不受化合物自發(fā)熒光干擾等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于復(fù)雜樣本的篩選。

3. 96孔/384孔雙規(guī)格，兼容高通量篩選

試劑盒提供96孔（100次反應(yīng)）和384孔（400次反應(yīng)）兩種規(guī)格，可與自動(dòng)化移液工作站無縫對(duì)接，實(shí)現(xiàn)高通量篩選（HTS）。用戶可在單次實(shí)驗(yàn)中完成數(shù)百至數(shù)千個(gè)候選抗體或化合物的初篩，快速識(shí)別能夠阻斷HSA-FcRn相互作用的中和抗體。

4. 內(nèi)置陽(yáng)性對(duì)照（可選）與嚴(yán)格質(zhì)控

雖然產(chǎn)品描述中未明確列出陽(yáng)性對(duì)照抗體，但試劑盒設(shè)計(jì)允許用戶使用已知的FcRn阻斷劑（如efgartigimod或工程化Fc片段）作為陽(yáng)性對(duì)照，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)體系的有效性。BPS Bioscience可提供推薦對(duì)照品。

二、應(yīng)用場(chǎng)景與科研價(jià)值

1. 自身免疫病治療性中和抗體的篩選

FcRn抑制劑通過加速致病性IgG的清除，已在重癥肌無力、尋常型天皰瘡、免疫性血小板減少癥等自身免疫病中顯示出臨床潛力。利用該試劑盒，研究人員可以：

篩選能夠阻斷HSA-FcRn相互作用的單克隆抗體、納米抗體或小分子化合物。

對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行親和力成熟和表位競(jìng)爭(zhēng)分析。

測(cè)定候選藥物的IC50，比較不同阻斷劑的效力。

2. 延長(zhǎng)治療性抗體半衰期的工程化篩選

通過Fc區(qū)突變（如M252Y/S254T/T256E，即YTE突變）增強(qiáng)抗體對(duì)FcRn的親和力，可顯著延長(zhǎng)抗體半衰期，減少給藥頻率。該試劑盒可用于：

評(píng)估工程化Fc變體與FcRn的結(jié)合能力（使用生物素化HSA作為競(jìng)爭(zhēng)配體）。

篩選具有高親和力但不阻斷HSA結(jié)合的Fc變體（因?yàn)镠SA與IgG結(jié)合FcRn的位點(diǎn)部分重疊但不同，需要根據(jù)具體設(shè)計(jì)選擇）。

優(yōu)化雙特異性抗體或Fc融合蛋白的Fc區(qū)序列。

3. 藥物聯(lián)合應(yīng)用的機(jī)制研究

FcRn不僅結(jié)合IgG，也結(jié)合HSA。一些疾病狀態(tài)下（如腎病綜合征）白蛋白水平異常，可能影響FcRn的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)功能。利用該試劑盒，可以研究：

病理濃度的HSA對(duì)FcRn-IgG結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)影響。

同時(shí)靶向IgG和HSA結(jié)合位點(diǎn)的雙功能阻斷劑的協(xié)同效應(yīng)。

三、技術(shù)參數(shù)與操作要點(diǎn)

規(guī)格與儲(chǔ)存

檢測(cè)格式：化學(xué)發(fā)光（96孔或384孔板）。

物種：人源。

靶點(diǎn)：HSA 與 FcRn (FCGRT/B2M)。

運(yùn)輸溫度：-80°C（干冰）。

穩(wěn)定性：按照指示儲(chǔ)存（各組分保存條件詳見說明書），試劑盒在收貨后6個(gè)月內(nèi)保持最佳性能。

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用（Research Use Only），不可用于臨床診斷。

操作流程概述（典型步驟）

1. 包被：將FcRn蛋白稀釋于包被緩沖液，加入微孔板，4°C過夜或37°C孵育2小時(shí)。

2. 封閉：加入封閉緩沖液，室溫孵育1小時(shí)。

3. 加樣：同時(shí)加入生物素化HSA和梯度稀釋的待測(cè)中和抗體（或阻斷劑），室溫孵育1-2小時(shí)。

4. 檢測(cè)：加入Streptavidin-HRP，室溫孵育30分鐘；洗滌后加入化學(xué)發(fā)光底物，立即讀取發(fā)光值。

5. 數(shù)據(jù)分析：計(jì)算抑制率，擬合IC50曲線。

注意事項(xiàng)

避免反復(fù)凍融：FcRn蛋白和生物素化HSA應(yīng)分裝保存于-80°C，避免多次凍融導(dǎo)致活性下降。

DMSO兼容性：如果篩選小分子化合物，確保終濃度DMSO不超過1%（通常可兼容）。

陽(yáng)性對(duì)照：強(qiáng)烈建議使用已知阻斷劑（如efgartigimod或抗FcRn抗體）作為陽(yáng)性對(duì)照，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。

非特異性結(jié)合：設(shè)置無FcRn包被的對(duì)照孔，評(píng)估待測(cè)抗體的非特異性結(jié)合。

四、文獻(xiàn)參考

Chaudhury C., et al., 2006 Biochemistry.  45 (15): 4983-90.

Dall'Acqua W.F., et al., 2002 J Immunol. 169(9): 5171-80.

Sand K.M.K., et al., 2014 J Biol Chem. 289 (24):17228-39.