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一、產(chǎn)品概述
由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的純化正常兔lgG(5mg/ml)(貨號(hào):P120-101)為從正常兔血清中分離純化的總免疫球蛋白G(IgG),經(jīng)離子交換層析純化,未偶聯(lián)任何標(biāo)簽或標(biāo)記物。正常兔IgG廣泛用作免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中的陽性對(duì)照、同型對(duì)照或封閉試劑,用于評(píng)估非特異性背景或驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)體系的有效性。本產(chǎn)品濃度為5 mg/ml,緩沖液為含疊氮化鈉的磷酸鹽緩沖液(PBS),可在2–8°C穩(wěn)定保存2年。
二、關(guān)鍵規(guī)格
參數(shù) | 詳細(xì)信息
物種 | 兔
表位標(biāo)簽 | 無
同型 | IgG
偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)
純度 | 純化(非親和純化,采用分級(jí)分離+DEAE層析)
濃度 | 5 mg/ml
保存條件 | 2 – 8 °C
有效期 | 收貨后2年
緩沖液 | 磷酸鹽緩沖液(PBS),含0.09%疊氮化鈉
三、產(chǎn)品形式與組成
本品以液體形式提供,溶于磷酸鹽緩沖液(PBS),pH 7.2–7.4,并加入0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。總蛋白濃度為5 mg/ml(基于IgG在280 nm處吸光系數(shù)A280 = 1.4,1 mg/ml IgG)。包裝規(guī)格未明確列出,通常根據(jù)訂單提供不同體積(如1 mg、5 mg、10 mg等),請(qǐng)以實(shí)際產(chǎn)品標(biāo)簽為準(zhǔn)。
四、生產(chǎn)與純化工藝
純化方法
本產(chǎn)品通過分級(jí)分離(fractionation) 結(jié)合DEAE(二乙氨乙基)離子交換層析從正常兔血清中分離獲得。該工藝可有效去除血清中的白蛋白、其他球蛋白(IgA、IgM)及非蛋白組分,獲得高純度的總IgG。
濃度測(cè)定
采用比爾定律(Beer’s Law)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度,設(shè)定1 mg/ml IgG在280 nm波長處的吸光度為1.4。根據(jù)實(shí)際測(cè)得的A280值計(jì)算濃度:
濃度(mg/ml)= A280 / 1.4
五、質(zhì)量控制:免疫電泳驗(yàn)證
為確認(rèn)產(chǎn)品純度和免疫學(xué)特性,生產(chǎn)商對(duì)純化產(chǎn)物進(jìn)行了免疫電泳分析,結(jié)果表明:
1. 與抗兔IgG特異性血清反應(yīng):證實(shí)該產(chǎn)物為兔IgG。
2. 不與抗兔IgA或抗兔IgM血清反應(yīng):排除了IgA和IgM的污染,表明純度良好。
3. 與抗兔全血清反應(yīng)產(chǎn)生單一沉淀弧:該沉淀弧與抗IgG血清產(chǎn)生的沉淀弧一致,進(jìn)一步確認(rèn)產(chǎn)物僅為IgG,無其他血清蛋白殘留。
六、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
保存條件:2–8°C,嚴(yán)禁冷凍。反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致蛋白變性、聚集或活性喪失。
有效期:自收貨之日起2年,在未受污染且正確儲(chǔ)存條件下。
防腐劑:0.09%疊氮化鈉可抑制微生物生長。注意:疊氮化鈉對(duì)HRP有抑制作用,如用于HRP檢測(cè)系統(tǒng),請(qǐng)確保充分洗滌;如需去除疊氮化鈉,可使用脫鹽柱或透析。
七、ELISA陽性對(duì)照
1. 用PBS將本產(chǎn)品稀釋至1–10 ?g/ml,100 ?l/孔包被ELISA板,4°C過夜。
2. 洗滌、封閉后,加入稀釋后的抗兔IgG-HRP二抗(如1:5000)。
3. 孵育后洗滌,加底物顯色。應(yīng)出現(xiàn)明顯陽性信號(hào)。
八、同型對(duì)照(流式細(xì)胞術(shù))
1. 將本產(chǎn)品與實(shí)驗(yàn)一抗稀釋至相同濃度(如2 ?g/ml)。
2. 分別取等體積對(duì)照抗體和實(shí)驗(yàn)抗體,加入至不同樣本管中,4°C孵育30分鐘。
3. 洗滌后加入熒光標(biāo)記的抗兔IgG二抗,檢測(cè)信號(hào)。同型對(duì)照管應(yīng)給出背景熒光水平。
九、相關(guān)產(chǎn)品推薦
抗兔IgG(全分子)HRP偶聯(lián)物(用于WB/ELISA檢測(cè))
抗兔IgG輕鏈特異性HRP偶聯(lián)物(用于IP-WB,避免重鏈干擾)
正常山羊/小鼠IgG(用于不同物種的同型對(duì)照)
本產(chǎn)品為經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控的純化正常兔IgG,濃度高、純度高、穩(wěn)定性好,是免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中可靠的對(duì)照試劑。
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