一、產(chǎn)品概述

DDX6（DEAD-box解旋酶6）是DEAD-box RNA解旋酶家族的成員，在RNA代謝的多個環(huán)節(jié)中發(fā)揮核心作用，包括mRNA降解、翻譯調(diào)控及核糖核蛋白復合物組裝。由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本產(chǎn)品（A300-461A）為針對人DDX6蛋白C端區(qū)域的兔多克隆抗體，經(jīng)抗原親和純化，可同時識別人和小鼠來源的DDX6，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）。抗體識別表位位于DDX6第425–483位氨基酸（接近C末端），具有極高的檢測靈敏度，WB推薦稀釋度高達1:25,000–1:50,000。

二、關鍵規(guī)格

參數(shù) | 詳細信息

靶標 | DDX6

反應性 | 小鼠、人

應用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第433位至C末端區(qū)域

同型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 ug/ml

保存條件 | 2 – 8 °C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉

三、分子生物學背景

DDX6（Gene ID 1656，Uniprot P26196）是DEAD-box解旋酶家族的特征成員，其名稱來源于高度保守的DEAD（Asp-Glu-Ala-Asp）氨基酸基序。該家族蛋白的主要功能是作為ATP依賴的RNA解旋酶，利用ATP水解釋放的能量重塑RNA二級結(jié)構(gòu)或RNA-蛋白質(zhì)相互作用。

DDX6參與RNA代謝的全過程，包括：

pre-mRNA剪接：協(xié)助剪接體復合物的組裝與重排

RNA合成與降解：在mRNA衰變途徑（如無義介導的降解）中發(fā)揮作用

RNA輸出與翻譯：調(diào)控mRNA從細胞核向細胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運及翻譯起始效率

核糖核蛋白（RNP）復合物組裝：參與P小體（processing bodies）的形成，介導mRNA的暫時儲存或降解

研究表明，DDX6通過翻譯水平調(diào)控基因表達，正向調(diào)節(jié)細胞生長。其異常表達與多種腫瘤發(fā)生相關，故又稱癌基因RCK。DDX6的分子量約為54 kDa，別名包括：ATP依賴性RNA解旋酶p54、DEAD box蛋白6、HLR2、P54等。

四、儲存與穩(wěn)定性

抗體以1000 ug/ml濃度提供于Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8）中，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。收到后請于2–8°C條件下保存，嚴禁冷凍。反復凍融會導致蛋白變性和聚集，降低抗體效價。在正確儲存條件下，自收貨之日起可穩(wěn)定保存1年。

注意：疊氮化鈉對HRP活性有抑制作用。若后續(xù)使用HRP偶聯(lián)二抗進行化學發(fā)光檢測，務必確保洗滌充分；如需徹底去除疊氮化鈉，可使用脫鹽柱或透析。

應用與推薦工作條件

蛋白質(zhì)印跡（WB）

推薦稀釋范圍：1:25,000 – 1:50,000（超高靈敏度）

封閉與抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育（推薦4°C）

標準二抗：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體（貨號A120-101P）

免疫沉淀后WB的特殊要求：  

當檢測免疫沉淀產(chǎn)物中的DDX6時，為避免免疫沉淀抗體重鏈（約55 kDa）與DDX6（約54 kDa）分子量重疊造成的信號干擾，推薦使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體進行檢測，并在封閉緩沖液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020）。輕鏈特異性二抗僅識別約25 kDa的輕鏈，可完全排除重鏈區(qū)域的假陽性或遮蓋效應。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ug抗體 / mg細胞裂解液

標準IP流程：

1. 使用非變性裂解緩沖液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4，添加蛋白酶抑制劑）制備細胞裂解物。

2. 取1 mg總蛋白裂解液，加入6 ul本抗體（1000 ug/ml即1 ug/ul）。

3. 4°C旋轉(zhuǎn)孵育過夜（12–16小時）。

4. 加入20–30 ul Protein A瓊脂糖珠，繼續(xù)4°C孵育2–4小時。

5. 用裂解緩沖液洗滌瓊脂糖珠3–5次。

6. 加入SDS上樣緩沖液煮沸變性，進行WB檢測。

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋范圍：1:1000 – 1:5000

抗原修復：推薦使用Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）進行熱誘導抗原修復

樣本類型：福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片

IHC操作提示：

脫蠟和水化后，將切片置于Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）中，使用高壓鍋或微波爐進行熱修復（95–100°C，15–20分鐘）。

自然冷卻至室溫后，進行封閉（如5%正常山羊血清或BSA）。

一抗在推薦稀釋范圍內(nèi)進行滴定，建議從1:2000開始摸索最佳條件。

本抗體憑借其超高的檢測靈敏度（WB高達1:50,000）、跨物種反應性（人/小鼠）以及多應用兼容性（IHC/IP/WB），是研究RNA代謝、翻譯調(diào)控、P小體功能以及DDX6相關腫瘤發(fā)生機制的理想工具。