一、產(chǎn)品概述

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是糖酵解途徑中的關(guān)鍵酶，同時參與多種非代謝功能，如囊泡運輸、DNA修復(fù)和tRNA輸出。由于其在大多數(shù)細(xì)胞和組織中穩(wěn)定高表達(dá)，GAPDH被廣泛用作蛋白質(zhì)印跡和免疫組織化學(xué)實驗中的內(nèi)參對照。由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本產(chǎn)品（A300-641A）為針對人GAPDH蛋白中部區(qū)域的兔多克隆抗體，經(jīng)抗原親和純化，可同時識別人和小鼠來源的GAPDH。產(chǎn)品適用于免疫組織化學(xué)（IHC）和蛋白質(zhì)印跡（WB），提供明確優(yōu)化的工作條件，是蛋白表達(dá)定量和細(xì)胞代謝研究的可靠內(nèi)參工具。

二、關(guān)鍵規(guī)格

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶標(biāo) | GAPDH

反應(yīng)性 | 小鼠、人

應(yīng)用 | IHC, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第225–275位氨基酸區(qū)域

同型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 200 ug/ml

保存條件 | 2 – 8 °C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA和0.09%疊氮化鈉

三、分子生物學(xué)背景

GAPDH（基因名GAPDH，Gene ID 2597，Uniprot P04406）是糖酵解途徑的核心酶，催化甘油醛-3-磷酸在NAD?和無機(jī)磷酸存在下氧化磷酸化為1,3-二磷酸甘油酸。這一反應(yīng)產(chǎn)生高能磷酸化合物并生成NADH，是細(xì)胞能量代謝的關(guān)鍵步驟。

除經(jīng)典代謝功能外，GAPDH已被證實參與多種非糖酵解過程：

囊泡運輸：與微管和微絲相互作用，參與胞內(nèi)運輸。

DNA修復(fù)與復(fù)制：可進(jìn)入細(xì)胞核，參與堿基切除修復(fù)和DNA復(fù)制。

細(xì)胞骨架調(diào)控：與肌動蛋白絲結(jié)合，影響細(xì)胞形態(tài)和運動。

tRNA輸出：在細(xì)胞核內(nèi)與tRNA結(jié)合，協(xié)助其核質(zhì)運輸。

GAPDH的分子量約為36–38 kDa，在幾乎所有組織和細(xì)胞類型中持續(xù)高表達(dá)，且在不同實驗條件下表達(dá)水平相對穩(wěn)定，因此被廣泛用作Western Blot和IHC的上樣對照或內(nèi)參。

別稱：G3PD、GAPD、衰老相關(guān)基因9蛋白、附睪分泌性精子結(jié)合蛋白Li 162eP、Oct1共激活因子p38組分、肽基半胱氨酸S-亞硝基化酶等。

四、儲存與穩(wěn)定性

抗體以200 ug/ml濃度提供于Tris緩沖鹽水（TBS）中，含0.1% BSA（牛血清白蛋白）作為穩(wěn)定劑，以及0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。BSA的添加有助于防止低濃度抗體在儲存過程中的非特異性吸附和活性損失。收到后請于2–8°C條件下垂直保存，切勿冷凍。冷凍會導(dǎo)致蛋白變性和聚集。在正確儲存條件下，自收貨之日起可穩(wěn)定保存1年。

重要提示：疊氮化鈉會抑制辣根過氧化物酶（HRP）活性。若后續(xù)使用HRP偶聯(lián)二抗進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測，請確保洗滌步驟充分。由于本抗體濃度較低（200 ug/ml）且含BSA，不建議采用脫鹽或透析去除疊氮化鈉（會導(dǎo)致抗體過度稀釋），應(yīng)通過充分洗滌（3–5次，每次5–10分鐘）來消除其影響。

五、應(yīng)用與推薦工作條件

蛋白質(zhì)印跡（WB）

推薦稀釋范圍：1:2000 – 1:10,000

封閉與抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育（推薦4°C）

推薦二抗：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體（貨號A120-101P）

六、性能特點

GAPDH在常見細(xì)胞裂解液（如HeLa、HEK293T、NIH/3T3）中表達(dá)豐度很高，通常僅需5–15 ug總蛋白即可獲得強(qiáng)信號。

推薦起始稀釋度為1:5000。若信號過強(qiáng)（出現(xiàn)飽和或背景彌散），可提高至1:10,000；若信號偏弱（罕見），可降至1:2000。

由于本抗體濃度為200 ug/ml，較常規(guī)1000 ug/ml抗體低，使用時請注意稀釋計算：例如1:5000稀釋時，每10 ml工作液需2 ul抗體原液。

七、優(yōu)化建議

上樣量：建議上樣5–20 ug總蛋白。過高的上樣量可能導(dǎo)致內(nèi)參信號飽和，無法準(zhǔn)確校正目標(biāo)蛋白。

曝光時間：由于GAPDH豐度高，化學(xué)發(fā)光曝光時間通常很短（數(shù)秒至1分鐘），注意避免過曝導(dǎo)致條帶合并。

本抗體憑借其人鼠跨物種反應(yīng)性、多應(yīng)用兼容性（IHC/WB）以及優(yōu)化的實驗條件，是蛋白表達(dá)定量、代謝研究及組織定位中可靠的內(nèi)參工具。