一、產(chǎn)品概述

MED12（介體復合物亞基12）是多亞基介體復合物的核心組分，該復合物作為基因特異性轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶II（RNA Pol II）/通用轉(zhuǎn)錄因子機器之間的信號接口，在真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用。介體復合物最初被鑒定為甲狀腺激素受體的共激活因子，隨后發(fā)現(xiàn)其可作為多種轉(zhuǎn)錄因子的共激活因子發(fā)揮作用。研究表明，MED12與β-catenin的相互作用是Wnt信號通路依賴性轉(zhuǎn)錄所必需的。

本文介紹的由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的A300-774A型兔抗MED12多克隆抗體（貨號A300-774A）由美國生產(chǎn)，經(jīng)抗原親和純化，適用于小鼠及人源樣本的免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）檢測。

二、核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 詳細信息

靶標 | MED12（介體復合物亞基12）

反應性 | 小鼠，人

應用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人MED12蛋白第2127位氨基酸至C末端區(qū)間

同型 | IgG

標記 | 非偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ug/ml

儲存條件 | 2 - 8 °C

保質(zhì)期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與識別表位

本抗體采用表位特異性親和純化工藝制備。將針對MED12蛋白的特異性表位固定在固相支持物上，從抗血清中親和捕獲并純化特異性抗體。

A300-774A所識別的表位位于人MED12蛋白第2127位殘基至C末端（第2177位殘基）之間。編號依據(jù)NCBI參考序列NP_005111.2（GeneID 9968）。該C末端區(qū)域在MED12與其它轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的相互作用中具有重要功能意義。

四、濃度測定方法

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定。標準條件下，1 mg/mL IgG在280 nm波長處的吸光度（A280）為1.4。本抗體濃度為1000 ug/ml（即1 mg/ml），可直接按體積量取使用。

應用與實驗條件：

通用說明

所有免疫印跡實驗均采用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜孵育（4°C推薦）。

推薦稀釋比例與用量：

應用 | 推薦稀釋比例/用量 | 特殊說明

免疫組化（IHC） | 1:1000 - 1:5000 | 推薦使用pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液進行抗原修復（FFPE組織切片）

免疫沉淀（IP） | 6 ug/mg 裂解物 | 每mg細胞裂解蛋白使用6 ug抗體

免疫印跡（WB） | 1:2000 - 1:10000 | 推薦使用3-8% Tris-乙酸鹽凝膠

二抗選擇說明

細胞裂解物免疫印跡：

使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）。該二抗可同時識別兔IgG的重鏈和輕鏈，適用于檢測總IgG信號。

免疫沉淀產(chǎn)物的免疫印跡：

使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）。這一組合可有效避免免疫沉淀過程中變性釋放的抗體重鏈（約55 kDa）和輕鏈（約25 kDa）信號對目標蛋白（MED12分子量約230 kDa）檢測的干擾。因檢測抗體僅識別輕鏈，重鏈信號不會被放大，背景顯著降低。

五、產(chǎn)品使用與儲存

儲存注意事項

抗體應儲存于2 - 8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致抗體聚集和活性下降。緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉作為防腐劑，可有效抑制微生物污染。

穩(wěn)定性與保質(zhì)期

自收貨之日起，在推薦的儲存條件下保質(zhì)期為1年。建議分裝后使用，避免反復取用引入污染。

免疫組化特別說明：

對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）的組織切片，必須進行抗原修復。推薦方法：使用pH 6.0的枸櫞酸鹽緩沖液，通過微波或高壓加熱方式進行熱誘導抗原修復。修復后按1:1000至1:5000的稀釋度孵育一抗。初次使用建議從1:1000開始進行梯度預實驗。