一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為針對RBM9（RNA結合基序蛋白9，亦稱FOX2/RBFOX2）的兔源多克隆抗體（貨號：A300-864A），經(jīng)抗原親和純化，適用于流式細胞術（Flow Cyt）、免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）檢測。RBM9是Fox家族前體mRNA剪接調控蛋白的重要成員，在組織特異性可變剪接中發(fā)揮開關作用，調控外顯子包含/跳躍，同時被鑒定為雌激素受體（ER）的負向協(xié)同調節(jié)因子。

二、關鍵規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 詳細信息

靶標 | RBM9 / FOX2 / RBFOX2

反應性 | 大鼠、小鼠、人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人RBM9蛋白第1至50位氨基酸之間的區(qū)域

亞型 | IgG

純化方式 | 抗原親和純化

濃度 | 1000 ug/ml

存儲條件 | 2 - 8 °C

保質期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與特異性識別

本抗體識別的表位位于人RBM9蛋白第1至50位氨基酸殘基之間（參考編號NP_055124.1，GeneID 23543）。該區(qū)域對應RBM9的N末端結構域，包含獨特的RNA識別基序（RRM）上游序列，可有效區(qū)分RBM9與其他Fox家族成員（如RBM10/FOX3）。

抗體通過固相載體上固定的FOX2/RBM9特異性表位進行親和純化，確保高特異性和低背景。免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定（1 mg/mL IgG在A280處吸光度為1.4）。

種屬交叉反應性：已驗證反應性包括人、小鼠、大鼠，適用于跨物種研究。

四、應用方法與推薦條件

4.1 Western Blot（WB）

參數(shù) | 條件

稀釋比例 | 1:2000 - 1:10,000

封閉/稀釋液 | 5% 脫脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 過夜孵育

二抗（細胞裂解液WB） | 山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB） | 抗兔IgG輕鏈HRP結合抗體，封閉液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

操作提示：RBM9在多種組織/細胞中表達水平中等，推薦起始稀釋度為1:2000。若信號過強，可上調至1:5000-1:10000。

4.2 免疫沉淀（IP）

參數(shù) | 條件

推薦用量 | 6 ug 抗體 / mg 細胞裂解蛋白

該用量經(jīng)驗證可在人、小鼠或大鼠細胞裂解液中有效富集RBM9蛋白。建議使用蛋白A/G磁珠或瓊脂糖珠進行捕獲。

4.3 免疫組化（IHC）

參數(shù) | 條件

稀釋比例 | 1:2000 - 1:10,000（極寬范圍，推薦從1:2000起始）

抗原修復 | 推薦使用檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復

樣本類型 | 福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片

操作提示：本抗體在IHC中表現(xiàn)優(yōu)異，稀釋比高達1:10,000，極其經(jīng)濟。建議使用高壓或微波修復法，檸檬酸鹽pH 6.0為最佳選擇。

4.4 流式細胞術（Flow Cytometry）

參數(shù) | 條件

固定與透化 | 4% 甲醛固定，隨后用90%甲醇透化

抗體用量 | 0.25 ul / 1 × 10^6 細胞

詳細流程：

1. 收集細胞（1×10^6個/樣本），用PBS洗滌一次

2. 加入1 mL 4%甲醛，室溫固定15分鐘

3. PBS洗滌后，加入1 mL 90%預冷甲醇，冰上透化15-30分鐘

4. PBS洗滌兩次，重懸于含0.25 ul抗體的100 ul孵育緩沖液中，室溫避光孵育30-60分鐘

5. 洗滌后加入熒光標記二抗，上機檢測。

注意事項：甲醇透化步驟對抗原暴露至關重要，不可省略。本用量為經(jīng)驗值，初次實驗建議進行滴定（0.1-0.5 ul/10^6細胞）。

五、存儲與穩(wěn)定性

存儲溫度：2 - 8°C，請勿冷凍。高濃度（1000 ug/ml）配方在冷藏條件下極為穩(wěn)定。

保質期：收貨后1年內保持完整活性。

防腐劑：含0.09%疊氮化鈉，可抑制微生物污染。若下游應用涉及HRP檢測（如WB或IHC中直接使用HRP二抗），疊氮化鈉會抑制過氧化物酶活性，需通過透析或脫鹽柱去除。

緩沖液體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8），兼容多數(shù)免疫檢測體系。

本產(chǎn)品適用于RNA剪接調控、激素受體信號通路、發(fā)育生物學及腫瘤相關研究領域。