一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品（貨號：A302-368A）為針對人BRD3蛋白的兔源多克隆抗體（Whole IgG格式），經抗原親和純化，適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）檢測。BRD3（含溴結構域蛋白3）是一種雙溴結構域核蛋白，參與高乙酰化染色質區(qū)域的轉錄調控，與RNA聚合酶II介導的通過核小體的轉錄延伸密切相關。此外，BRD3與NUT基因的染色體易位融合蛋白已被證實與一種罕見的致死性癌種相關。

二、關鍵規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 詳細信息

靶標 | BRD3

反應性 | 人

宿主 | 兔 

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人BRD3蛋白第676位至C末端之間的區(qū)域

亞型 | IgG

純化方式 | 抗原親和純化

濃度 | 200 ug/ml

存儲條件 | 2 8 °C

保質期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與特異性識別

本抗體識別的表位位于人BRD3蛋白第676至726位氨基酸殘基之間（參考編號NP_031397.1，GeneID 8019）。該區(qū)域對應BRD3的C末端結構域，與已知的溴結構域功能相關。

抗體通過固相載體上固定的BRD3特異性表位進行親和純化，確保高特異性和低背景。免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定（1 mg/mL IgG在A280處吸光度為1.4）。

四、應用方法與推薦條件

4.1 Western Blot（WB）

參數(shù) | 條件

稀釋比例 | 1:2000 1:10,000

封閉/稀釋液 | 5% 脫脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 過夜孵育

二抗（細胞裂解液WB） | 山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB） | 抗兔IgG輕鏈HRP結合抗體，封閉液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

特別注意：當對免疫沉淀產物進行WB檢測時，建議使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗，以避免與IP中使用的抗體重鏈（約50 kDa）產生交叉反應。添加5%正常豬血清可進一步降低非特異性背景。

4.2 免疫沉淀（IP）

參數(shù) | 條件

推薦用量 | 6 ug 抗體 / mg 細胞裂解蛋白

該用量經驗證可在人細胞裂解液中有效富集BRD3蛋白。實際操作中可根據(jù)目標蛋白豐度進行微調，但建議保持總蛋白與抗體比例相對穩(wěn)定。

4.3 免疫組化（IHC）

參數(shù) | 條件

稀釋比例 | 1:100 1:500

抗原修復 | 推薦使用檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復

樣本類型 | 福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片

操作提示：對于FFPE切片，必須進行充分的抗原修復以暴露表位。檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）微波或高壓修復效果已驗證。建議同時設置陰性對照（兔IgG或未免疫血清）以評估背景染色。

五、存儲與穩(wěn)定性

存儲溫度：2 8°C，請勿冷凍。反復凍融會降低抗體活性。

保質期：收貨后1年內保持穩(wěn)定。

防腐劑：含0.09%疊氮化鈉，可抑制微生物污染。若下游應用涉及HRP檢測（如WB或IHC中直接使用HRP二抗），疊氮化鈉會抑制過氧化物酶活性，需通過透析或脫鹽柱去除后再使用。

穩(wěn)定劑：緩沖液中含0.1% BSA，有助于維持抗體在低濃度下的穩(wěn)定性，減少非特異性吸附。

六、實驗應用建議總結

1. 稀釋優(yōu)化：對于初次使用的樣本類型，建議在推薦稀釋范圍（WB 1:2000-1:10000；IHC 1:100-1:500）內進行梯度實驗，以獲得最佳信噪比。

2. IP注意事項：6 ug/mg裂解液為起始用量，若目標蛋白豐度較低，可適當增加抗體用量至8-10 ug/mg。

3. IHC關鍵點：必須使用pH 6.0檸檬酸鹽修復液；封閉步驟推薦使用與二抗來源匹配的正常血清（如山羊血清），以避免交叉反應。

4. WB二抗選擇：檢測細胞裂解液時使用常規(guī)抗兔IgG（H+L）即可；檢測IP產物時必須使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗，避免重鏈干擾（約50 kDa處）。

5. 陽性對照：建議使用已知高表達BRD3的人細胞系（如HeLa、HEK293）裂解液作為WB陽性對照；IHC可使用扁桃體或睪丸組織作為陽性對照。

本產品適用于人BRD3蛋白的表達檢測、蛋白互作研究（IP-WB聯(lián)合分析）及組織定位研究（IHC），尤其適用于染色質調控、轉錄延伸及NUT中線癌相關研究領域。