腫瘤壞死因子α(TNFα)ELISA是一種夾心酶免疫分析法，用于體外定量測量大鼠血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液和細(xì)胞培養(yǎng)上清中的TNFα。antibodies-online提供試劑盒組分的驗(yàn)證數(shù)據(jù)（WB），因此這是一種由高質(zhì)量試劑組成的可靠ELISA試劑盒產(chǎn)品。

艾美捷腫瘤壞死因子α(TNFα)ELISA試劑盒：

貨號：ABIN6574141

目標(biāo)：腫瘤壞死因子α（TNF alpha）

反應(yīng)性：大鼠

檢測方法：比色法

方法類型：夾心ELISA

檢測范圍：15.6 pg/mL - 1000 pg/mL

最低檢測限：15.6 pg/mL

應(yīng)用：ELISA

樣本類型：細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液、血漿、血清、組織勻漿

分析方法：定量

特異性：該測定法對檢測腫瘤壞死因子α（TNFα）具有高靈敏度和極佳的特異性。

交叉反應(yīng)性（詳情）：未觀察到腫瘤壞死因子α（TNFα）與其類似物之間有顯著的交叉反應(yīng)或干擾。

靈敏度：5.9 pg/mL

樣本體積：100 μL

測定時(shí)間：3小時(shí)

板：預(yù)涂覆

使用注意事項(xiàng)：與本試劑盒配套使用的停止液是酸性溶液。使用此材料時(shí)，請佩戴眼睛、手、面部和衣物保護(hù)。

儲存：4 °C/-20 °C

對于未開封的試劑盒：所有試劑應(yīng)根據(jù)瓶身上的標(biāo)簽存放。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測試劑A、檢測試劑B和96孔條板應(yīng)在收到后存放在-20°C，而其他試劑應(yīng)存放在4°C。

對于已開封的試劑盒：剩余的試劑必須按照上述儲存條件存放。此外，請將未使用的孔放回含有干燥劑的鋁箔袋中，并用拉鏈密封鋁箔袋。

僅限研究使用

腫瘤壞死因子α(TNFα)ELISA試劑盒組分：

預(yù)涂覆、即用型96孔條板，平底

96孔板封蓋

參考標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

檢測試劑A

檢測試劑B

測定稀釋液A

測定稀釋液B

試劑稀釋液（如果檢測試劑為凍干）

TMB底物

停止液

洗滌緩沖液（30倍濃縮）

說明書

關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的信息：

標(biāo)準(zhǔn)品可能是重組蛋白或天然蛋白，這將取決于特定的試劑盒。此外，表達(dá)系統(tǒng)可能是大腸桿菌、酵母或哺乳動物細(xì)胞。標(biāo)準(zhǔn)品中含有0.05%的proclin 300作為防腐劑。

關(guān)于試劑的信息：

試劑盒中使用的停止液是濃度為1 mol/L的硫酸。洗滌液是TBS。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中含有0.02%的疊氮鈉，測定稀釋液A和測定稀釋液B中含有0.01%的疊氮鈉。有些試劑盒中可能含有BSA。

關(guān)于抗體的信息：

不同試劑盒中提供的抗體及其宿主會有所不同。

方案：

準(zhǔn)備所有試劑、樣本和標(biāo)準(zhǔn)品，

向每個(gè)孔中加入100μL的標(biāo)準(zhǔn)品或樣本。在37°C下孵化1小時(shí)，

抽吸并加入100μL準(zhǔn)備好的檢測試劑A。在37°C下孵化1小時(shí)，

抽吸并洗滌3次，

加入100μL準(zhǔn)備好的檢測試劑B。在37°C下孵化30分鐘，

抽吸并洗滌5次，

加入90μL底物溶液。在37°C下孵化10-20分鐘，

加入50μL停止液。立即在450nm處讀取。

試劑準(zhǔn)備：

使用前將所有試劑盒組分和樣本平衡至室溫（18-25°C）。如果試劑盒不會一次性用完，請只取出當(dāng)前實(shí)驗(yàn)所需的條帶和試劑，并將剩余的條帶和試劑留在所需的條件下。

標(biāo)準(zhǔn)品 - 用0.5 mL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液重組標(biāo)準(zhǔn)品，室溫下放置10分鐘，輕輕搖晃（不要產(chǎn)生泡沫）。庫存溶液中標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為1,000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)含有0.25 mL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的試管，并制作雙倍稀釋系列。在下一個(gè)轉(zhuǎn)移前徹底混合每個(gè)試管。設(shè)置7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，如1,000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL、125pg/mL、62.5pg/mL、31.2pg/mL、15.6pg/mL，最后一個(gè)微量離心管與標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為空白，即0pg/mL。

檢測試劑A和檢測試劑B - 如果為凍干品，用150μL的試劑稀釋液重組檢測試劑A，室溫下放置10分鐘，輕輕搖晃（不要產(chǎn)生泡沫）。使用前請短暫離心或旋轉(zhuǎn)庫存檢測A和檢測B。分別用測定稀釋液A和B將它們稀釋至工作濃度100倍。

洗滌液 - 將20 mL的洗滌液濃縮液（30倍）與580 mL的去離子或蒸餾水稀釋，制備600 mL的洗滌液（1倍）。

TMB底物 - 用無菌吸頭吸取所需劑量的溶液，不要將殘余溶液重新倒入瓶中。

注意：

不允許直接在孔中進(jìn)行連續(xù)稀釋。

請?jiān)跍y定前15分鐘內(nèi)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品。請不要直接在37°C下溶解試劑。

請根據(jù)說明書仔細(xì)重組標(biāo)準(zhǔn)品或工作檢測試劑A和B，并避免產(chǎn)生泡沫，輕輕混合直至晶體完全溶解。為了減少移液引起的不精確性，請使用小體積，并確保移液器已校準(zhǔn)。建議一次性吸取超過10μL。

重組的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測試劑A和檢測試劑B只能使用一次。

如果洗滌液濃縮液（30倍）中形成晶體，請加熱至室溫并輕輕混合，直至晶體完全溶解。

受污染的水或試劑準(zhǔn)備容器會影響檢測結(jié)果。

樣本準(zhǔn)備：

建議使用新鮮樣本，避免長時(shí)間儲存，否則樣本中的蛋白質(zhì)可能會降解和變性，導(dǎo)致假結(jié)果。因此，樣本應(yīng)在2 - 8°C下短期儲存，或分裝后在-20°C（≤1個(gè)月）或-80°C（≤3個(gè)月）下儲存。應(yīng)避免反復(fù)凍融。測定前，冷凍樣本應(yīng)緩慢解凍并離心以去除沉淀物。

如果說明書中未指定樣本類型，需要進(jìn)行初步測試以確定與試劑盒的兼容性。

如果使用裂解緩沖液制備組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清，引入的化學(xué)物質(zhì)可能會導(dǎo)致偏差。推薦的稀釋因子僅供參考。

請?jiān)谶M(jìn)行測試前估算樣本的濃度。如果值不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，則必須確定特定實(shí)驗(yàn)的最佳樣本稀釋度。然后，應(yīng)使用PBS（pH =7.0-7.2）稀釋樣本。

測定精度

內(nèi)部測定精度（測定內(nèi)的精度）：在一塊板上分別測試3個(gè)低、中、高目標(biāo)水平的樣本，每個(gè)樣本測試20次。

外部測定精度（測定間的精度）：在3個(gè)不同的板上測試3個(gè)低、中、高目標(biāo)水平的樣本，每個(gè)板上8個(gè)重復(fù)。

CV(%) = SD/meanX100

內(nèi)部測定：CV < 10%

外部測定：CV < 12%

標(biāo)準(zhǔn)曲線：

文獻(xiàn)參考：

Palladini, Cagna, Di Pasqua, Adorini, Croce, Perlini, Ferrigno, Berardo, Vairetti: "Obeticholic Acid Reduces Kidney Matrix Metalloproteinase Activation Following Partial Hepatic Ischemia/Reperfusion Injury in Rats." in: Pharmaceuticals (Basel, Switzerland), Vol. 15, Issue 5, (2022)

Mousa, Alhumaydhi, Abdellatif, Abdulmonem, AlKhowailed, Alsagaby, Al Rugaie, Alnuqaydan, Aljohani, Aljasir, Alwashmi, Soliman, Yosof, Elsheikh, Babiker, Alsuhaibani, Hegazy, Seleem: "Curcumin and ustekinumab cotherapy alleviates induced psoriasis in rats through their antioxidant, anti-inflammatory, and antiproliferative effects." in: Cutaneous and ocular toxicology, pp. 1-10, (2021)

Ma, Zhao, Zhang, Chen: "Intra-arterial human urinary kallidinogenase alleviates brain injury in rats with permanent middle cerebral artery occlusion through PI3K/AKT/FoxO1 signaling pathway." in: Brain research, Vol. 1687, pp. 129-136, (2019)