ALPCO-脂聯(lián)素(大鼠)ELISA試劑盒Rat Adiponectin ELISA：用于大鼠血清和血漿中脂聯(lián)素的定量測定。

艾美捷脂聯(lián)素(大鼠)ELISA試劑盒/Rat Adiponectin ELISA（22-ADPRT-E01）檢測原理：

這是一種使用兩種特異性、高親和力抗體的夾心測定法。樣本中的脂聯(lián)素與涂覆在微孔板的第一抗體結(jié)合。隨后，第二特異性抗脂聯(lián)素抗體依次與固定的脂聯(lián)素結(jié)合。第二抗體被生物素化，并與鏈霉親和素-過氧化物酶-酶共軛物混合應(yīng)用。在最后的底物反應(yīng)中，混合物的顏色將定量取決于樣本中脂聯(lián)素的水平。

儲存條件：

收到試劑盒后，直到有效期之前，請將其存放在2-8°C。

儲存壽命：

各組分初次開啟后的保質(zhì)期為4周，未使用的條帶和微孔板應(yīng)與干燥劑一起密封存放在夾鎖袋中，存放在2-8°C，使用時請按照提供的框架操作。重組的標準品A-F和對照血清KS1與KS2必須存放在-20°C（最長4周）。注意：標準品只能解凍一次——如有必要，請分裝在適當?shù)捏w積中存放。再次使用時，請快速但溫和地解凍（避免溫度升高超過室溫，避免過度漩渦混合）。避免反復(fù)凍融。1:20稀釋的洗滌緩沖液WP在2-8°C下穩(wěn)定，可存放長達4周。

試劑準備：

使用前將所有試劑平衡至室溫（20 - 25°C）。緩沖液中可能的沉淀物在使用前必須通過混合和/或加熱溶解。不能混合不同批號的試劑。

重組：

標準品A-F和對照KS1與KS2用稀釋緩沖液VP重組。建議將重組后的試劑在室溫下放置15分鐘，然后用漩渦混合器徹底但溫和地混合（不應(yīng)產(chǎn)生泡沫）。

稀釋：

重組后，將對照血清KS1和KS2用稀釋緩沖液VP以與樣本相同的比例（1:1500）稀釋。

所需體積的洗滌緩沖液WP是通過將提供的20倍濃縮液與去離子水以1:20稀釋得到的。

測定程序：

進行測定時，標準品A-F、對照血清KS1和KS2以及樣本應(yīng)盡快（例如<15分鐘）移液。為了減少由于孵化時間差異導(dǎo)致的變異性，抗體-POD共軛物AK以及隨后的底物溶液S應(yīng)與樣本以相同的順序和時間間隔添加到板上。停止溶液SL應(yīng)與底物溶液S以相同的順序添加到板上。所有測定（標準品A-F、對照血清KS1和KS2以及樣本）應(yīng)以雙份進行。為了獲得最佳結(jié)果，建議準確移液并遵守協(xié)議。

孵化：

室溫孵化意味著在20 - 25°C下孵化。底物溶液S穩(wěn)定的四甲基聯(lián)苯胺是光敏性的；存儲和孵化時應(yīng)避光。

搖晃：

推薦的板振蕩器搖晃速率為350轉(zhuǎn)每分鐘。然而，可能需要根據(jù)使用的板振蕩器型號進行調(diào)整。搖晃不足可能導(dǎo)致溶液混合不充分，從而導(dǎo)致光密度低、變異性高和/或假值，搖晃過度可能導(dǎo)致光密度高和/或假值。

洗滌：

正確的洗滌對于測試的安全性、可靠性和精確性至關(guān)重要。

不完全洗滌是常見的，并且會對測定結(jié)果產(chǎn)生不利影響。不當?shù)南礈旒夹g(shù)會增加變異性，例如空白值高，可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。

高背景值或高變異性可能表明洗滌問題。

所有洗滌必須使用提供的稀釋至使用濃度的洗滌緩沖液WP進行。每個洗滌周期和孔的洗滌體積至少為300 ?L。

建議手動洗滌。洗滌緩沖液可以通過多步設(shè)備、多通道移液管或噴霧瓶分配。液體可以通過在水槽上方動態(tài)擺動微孔板來移除。如果使用抽吸設(shè)備，必須注意不要劃傷孔內(nèi)表面。在每個洗滌步驟之后，應(yīng)通過倒置板并在無塵吸水紙上反復(fù)拍打以去除剩余液體。

當使用自動微孔板洗滌器時，必須仔細遵循使用說明。必須進行設(shè)備調(diào)整，例如板幾何形狀和提供的洗滌參數(shù)。分配和抽吸管路不得劃傷孔內(nèi)表面。必須采取措施，使每次抽吸步驟后剩余的液體量最小化。在每個洗滌周期的最后一次抽吸步驟之后，可以通過倒置板并在無塵吸水紙上反復(fù)拍打來控制，可能的剩余液體可以被去除。

必須考慮處理潛在感染材料的危險。

典型標準曲線示例：

圖1中的示例數(shù)據(jù)和標準曲線不能用于計算測試結(jié)果。每次測試都應(yīng)生成一個標準曲線。

表1描述了一個典型的標準曲線數(shù)據(jù)。

文獻參考：

1. Nakano, Y., et al., Isolation and characterization of GBP28, a novel gelatinbinding protein purified from human plasma. J Biochem (Tokyo), 1996. 120(4): p. 803-12.

2. Pajvani, U.B., et al., Structure-function studies of the adipocyte-secreted hormone Acrp30/adiponectin. Implications for metabolic regulation and bioactivity. J Biol Chem, 2003. 278(11): p. 9073-85.

3. Tsao, T.S., et al., Role of disulfide bonds in Acrp30/adiponectin structure and signaling specificity. Different oligomers activate different signal transduction pathways.J Biol Chem, 2003. 278(50): p. 50810-7.

4. Shimada, K., T. Miyazaki, and H. Daida, Adiponectin and atherosclerotic disease.Clin Chim Acta, 2004. 344(1-2): p. 1-12.