IgE檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA），用于測量小鼠血清和血漿樣本中的IgE。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品IgE(小鼠)ELISA, 96孔。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

IgE(小鼠)ELISA, 96孔檢測原理：

雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的原理如圖1所示。在這個檢測中，樣本中存在的IgE與已經吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgE抗體發(fā)生反應。洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗IgE抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的IgE形成復合物。經過另一次洗滌步驟，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）來檢測與免疫吸附劑結合的酶。結合酶的量與被測試樣本中IgE的濃度成正比；450納米處的吸光度是測試樣本中IgE濃度的量度。測試樣本中的IgE量可以通過從標準品構建的標準曲線進行插值，并根據樣本稀釋進行校正。

試劑（足夠進行96次測定的數量）

稀釋液濃縮液（測定緩沖液） 一瓶含有50 mL的5倍濃縮稀釋測定緩沖液。

洗滌液濃縮液 一瓶含有50 mL的20倍濃縮洗滌液。

酶-抗體結合物 100倍 一瓶含有150 ?L的親和純化的抗小鼠IgE抗體與辣根過氧化物酶結合的穩(wěn)定緩沖液。

顯色底物溶液 一瓶含有12 mL的3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）和過氧化氫在檸檬酸緩沖液中，pH值為3.3。

終止液 一瓶含有12 mL的0.3 M硫酸。警告：避免與皮膚接觸。

抗小鼠IgE ELISA微孔板 十二個可移動的八孔條在孔架框中。每個孔都涂有親和純化的抗小鼠IgE。

小鼠IgE校準物 一瓶含有凍干的小鼠IgE校準物。

試劑準備

稀釋液濃縮液 提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:5稀釋（1份緩沖液濃縮液，4份去離子水）。

洗滌液濃縮液 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:20稀釋（1份緩沖液濃縮液，19份去離子水）。當儲存溫度較低時，濃縮液中出現結晶并不罕見。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解結晶。

酶-抗體結合物 通過向每個微孔板測試條添加10 ?L酶-抗體結合物至990 ?L的1X稀釋液中，計算每個微孔板測試條所需的工作結合物溶液量。均勻混合，但要輕柔。避免起泡。

顯色底物溶液 按提供的狀態(tài)即開即用。

終止液 按提供的狀態(tài)即開即用。

抗小鼠IgE ELISA微孔板 按提供的狀態(tài)即開即用。揭開微孔板袋，從袋中取出板。移除在測定中不會使用的條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑。

小鼠IgE校準物 向小鼠IgE校準物中加入1.0 mL的蒸餾水或去離子水，輕輕混合直至溶解。校準物現在的濃度為1.875 ?g/mL（如果打算將來使用，重組的校準物應分裝并冷凍）。小鼠IgE標準品需要在立即使用前準備。每步之間混合良好。避免起泡。

操作步驟

1. 使用前將所有試劑置于室溫下。

2. 分別向以下標準品孔中移液100 μL（每個標準品做兩份）：

標準品0（0.0 ng/mL）

標準品1（6.25 ng/mL）

標準品2（12.5 ng/mL）

標準品3（25 ng/mL）

標準品4（50 ng/mL）

標準品5（100 ng/mL）

標準品6（200 ng/mL）

標準品7（400 ng/mL）

3. 向預先指定的孔中移液100 μL的樣本（每個樣本做兩份）。

4. 在室溫下孵育微孔板三十（30 ± 2）分鐘。孵育期間保持板蓋覆蓋并保持水平。

5. 孵育后，抽吸掉孔中的內容物。

6. 用適當稀釋的洗滌液完全填滿每個孔并抽吸。重復三次，總共進行四次洗滌。如果手動洗滌：用洗滌緩沖液完全填滿孔，倒置板子然后將內容物倒入廢液容器。接著用吸水紙迅速拍打孔以去除殘留的緩沖液。重復三次，總共進行四次洗滌。

7. 向每個孔中移液100 μL適當稀釋的酶-抗體結合物。在室溫下孵育三十（30 ± 2）分鐘。孵育期間保持板蓋覆蓋，避光并保持水平。

8. 如步驟5和6所述洗滌和吸干孔。

9. 向每個孔中移液100 μL的TMB底物溶液。

10. 在暗處室溫下精確孵育十分鐘（10）。

11. 十分鐘后，向每個孔中加入100 μL的終止液。

12. 測定每個孔內內容物的吸光度（450 nm）。根據制造商的規(guī)格校準板讀數器。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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