大鼠IgE ELISA是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測定法（ELISA），用于測量大鼠血清或血漿中的IgE。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品IgE(大鼠)ELISA, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

IgE(大鼠)ELISA, 96孔檢測原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的原理如圖1所示。在這個(gè)檢測中，樣本中存在的IgE與已經(jīng)吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgE抗體發(fā)生反應(yīng)。洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗IgE抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的IgE形成復(fù)合物。經(jīng)過另一次洗滌步驟，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來檢測與免疫吸附劑結(jié)合的酶。結(jié)合酶的量與被測試樣本中IgE的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣本中IgE濃度的量度。測試樣本中的IgE量可以通過從標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行插值，并根據(jù)樣本稀釋進(jìn)行校正。

試劑（足夠進(jìn)行96次測定的數(shù)量）

稀釋液濃縮液（測定緩沖液） 一瓶含有50 mL的5倍濃縮稀釋測定緩沖液。

洗滌液濃縮液 一瓶含有50 mL的20倍濃縮洗滌液。

酶-抗體結(jié)合物 100倍 一瓶含有150 ?L的親和純化的抗大鼠IgE抗體與辣根過氧化物酶結(jié)合的穩(wěn)定緩沖液。

顯色底物溶液 一瓶含有12 mL的3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和過氧化氫在檸檬酸緩沖液中，pH值為3.3。

終止液 一瓶含有12 mL的0.3 M硫酸。警告：避免與皮膚接觸。

抗大鼠IgE ELISA微孔板 十二個(gè)可移除的八孔（8）微孔條在孔架框中。每個(gè)孔都涂有親和純化的抗大鼠IgE。

大鼠IgE校準(zhǔn)物 一瓶含有凍干的大鼠IgE校準(zhǔn)物。

試劑準(zhǔn)備

稀釋液濃縮液 提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:5稀釋（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）。

洗滌液濃縮液 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:20稀釋（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）。當(dāng)儲(chǔ)存溫度較低時(shí)，濃縮液中出現(xiàn)結(jié)晶并不罕見。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解結(jié)晶。

酶-抗體結(jié)合物 通過向每個(gè)微孔板測試條添加10 ?L酶-抗體結(jié)合物至990 ?L的1X稀釋液中，計(jì)算每個(gè)微孔板測試條所需的工作結(jié)合物溶液量。均勻混合，但要輕柔。避免起泡。

顯色底物溶液 按提供的狀態(tài)即開即用。

終止液 按提供的狀態(tài)即開即用。

抗大鼠IgE ELISA微孔板 按提供的狀態(tài)即開即用。揭開微孔板袋，從袋中取出板。移除在測定中不會(huì)使用的條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑。

大鼠IgE校準(zhǔn)物 請(qǐng)參考分析證書以準(zhǔn)備大鼠IgE校準(zhǔn)物。

結(jié)果

從每個(gè)樣本的測試值中減去平均背景值。

使用標(biāo)準(zhǔn)品觀察到的結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。適當(dāng)?shù)那€擬合是四參數(shù)邏輯曲線。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合。

從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值測試樣本值。校正血清稀釋因子，以得出原始樣本中的IgE濃度。

程序的限制

當(dāng)按照包裝說明書中的信息完全理解并遵循良好的實(shí)驗(yàn)室操作實(shí)踐進(jìn)行測定程序時(shí)，將獲得可靠和可重復(fù)的結(jié)果。

可能影響測定性能的因素包括儀器功能的正常運(yùn)行、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質(zhì)量、試劑和樣本移液的準(zhǔn)確性、洗滌技術(shù)、孵育時(shí)間或溫度。

不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合或替換。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

作為ALPCO在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的ALPCO產(chǎn)品。