乙型肝炎表面抗原或HBsAg是乙型肝炎病毒包膜中Z重要的蛋白，負(fù)責(zé)急性和慢性病毒性肝炎。表面抗原包含決定因素“a”，這是所有已知病毒亞型共有的，通過兩個(gè)不同的亞組（ay和ad）在免疫學(xué)上區(qū)分。近年來，通過高靈敏度免疫分析檢測(cè)HBsAg的能力，促進(jìn)了對(duì)其全球分布和流行病學(xué)的理解，并從根本上降低了輸血中感染的風(fēng)險(xiǎn)。

第四代酶免疫分析（ELISA）用于一步法測(cè)定人血漿和血清中的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）。該試劑盒旨在篩查血液?jiǎn)挝唬軌驒z測(cè)HBsAg突變體，并在HBV感染患者的隨訪中得到應(yīng)用。僅限于“體外”診斷使用。

艾美捷Biogradetech-HBsAg ELISA試劑盒（BGT-KET-152）檢測(cè)原理：

一種針對(duì)HBsAg的“a”、“d”和“y”決定因素的特異性小鼠單克隆抗體混合物被固定在微孔板表面。將患者血清/血漿與第二種小鼠單克隆抗體混合，這些抗體與辣根過氧化物酶（HRP）結(jié)合，并且針對(duì)“a”決定因素的不同表位和“preS”。在樣本中存在HBsAg時(shí)形成的特定免疫復(fù)合物被固相捕獲。在一步法孵育結(jié)束時(shí)，清洗微孔板以去除未結(jié)合的血清蛋白和HRP結(jié)合物。然后加入底物/色原，并且在捕獲的HBsAg免疫復(fù)合物存在的情況下，無色底物被結(jié)合的HRP結(jié)合物水解成有色最終產(chǎn)物。在阻斷酶反應(yīng)后，通過ELISA讀數(shù)器測(cè)量其吸光度。顏色強(qiáng)度與樣本中存在的HBsAg量成正比。ULTRA版本特別適用于自動(dòng)化篩查，并且能夠檢測(cè)“s”突變體。

所需但不提供的材料：

1. 校準(zhǔn)的微量移液管（150微升、100微升和50微升）和一次性塑料吸頭。

2. EIA級(jí)水（雙蒸餾或去離子，經(jīng)木炭處理以去除用作消毒劑的氧化性化學(xué)物質(zhì)）。

3. 具有60分鐘或更長(zhǎng)范圍的定時(shí)器。

4. 吸水紙。

5. 校準(zhǔn)的ELISA微孔板恒溫孵育箱（干式或濕式），能夠以1300轉(zhuǎn)/分鐘 +/- 150的速度提供搖晃，設(shè)定在+37°C。

6. 校準(zhǔn)的ELISA微孔板閱讀器，具有450納米（讀數(shù)）和620-630納米（空白）濾光片。

7. 校準(zhǔn)的ELISA微孔板洗滌器。

8. 渦旋混合器或類似的混合工具。

樣本：準(zhǔn)備和警告

1. 通過無菌靜脈穿刺采集血液，并使用臨床實(shí)驗(yàn)室分析樣本的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備血漿或血清。使用檸檬酸鹽、EDTA和肝素制備樣本的過程中沒有觀察到影響。

2. 避免向樣本中添加任何防腐劑；特別是亞硝酸鹽，因?yàn)檫@種化學(xué)物質(zhì)會(huì)影響結(jié)合物的酶活性，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

3. 必須用代碼或名稱清楚地標(biāo)識(shí)樣本，以避免結(jié)果解釋錯(cuò)誤。當(dāng)試劑盒用于血液?jiǎn)挝缓Y查時(shí)，強(qiáng)烈推薦使用條碼標(biāo)簽和電子閱讀。

4. 溶血（紅色）和脂血（“乳狀”）樣本必須丟棄，因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)產(chǎn)生虛假結(jié)果。含有纖維蛋白殘留、大顆粒或微生物絲和體的樣本也應(yīng)丟棄，因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果。凝血途徑改變的樣本，在采血和制備血清/血漿后呈現(xiàn)顆粒，如來自血液透析患者的樣本，可能會(huì)產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

5. 血清和血漿可以在+2°C至+8°C的一次性收集管中儲(chǔ)存，自采集后最多五天。不要冷凍一次性收集管。對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間的儲(chǔ)存，仔細(xì)從一次性收集管中取出的血清和血漿樣本，可以在-20°C下冷凍儲(chǔ)存至少12個(gè)月。任何冷凍樣本不應(yīng)凍融超過一次，因?yàn)檫@樣可能會(huì)產(chǎn)生影響測(cè)試結(jié)果的顆粒。

6. 如果解凍后存在一些混濁或懷疑存在微粒，應(yīng)通過一次性0.2-0.8μm過濾器過濾樣本以清潔它進(jìn)行測(cè)試，或者使用兩步替代方法。

結(jié)果解釋：

測(cè)試結(jié)果根據(jù)以下表格，解釋為樣本OD450nm/620-630nm（S）與截止值（Co）的比率，用數(shù)學(xué)表示為 S/Co：

陰性結(jié)果表明患者未感染乙型肝炎病毒（HBV），因此該血液?jiǎn)挝豢梢赃M(jìn)行輸血。

任何呈現(xiàn)不確定結(jié)果的患者應(yīng)在初次樣本采集后1-2周重新采集樣本進(jìn)行復(fù)測(cè)；該血液?jiǎn)挝徊粦?yīng)進(jìn)行輸血。

陽性結(jié)果表明存在HBV感染，因此應(yīng)對(duì)患者進(jìn)行相應(yīng)的治療或該血液?jiǎn)挝粦?yīng)被廢棄。

HBsAg ELISA試劑盒文獻(xiàn)參考：

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