本檢測是一種經(jīng)濟高效的一步法程序，用于測定藥物或蛋白質(zhì)對微管蛋白聚合的影響。它是基于Bonne, D.等人（1）最初描述的檢測方法的改進版。聚合過程通過熒光增強來跟蹤，因為熒光報告分子在聚合過程中被整合到微管中。標準檢測使用神經(jīng)元微管蛋白（貨號T240），生成代表微管形成三個階段的聚合曲線，即成核、生長和穩(wěn)態(tài)平衡。其他微管蛋白，如HeLa細胞微管蛋白（貨號H001），也可以用于此檢測。每次檢測的體積為50 ?L，微管蛋白濃度低（最終濃度為2 mg/ml，每次檢測100 ?g），這使得它成為研究更昂貴的癌細胞微管蛋白試劑和高通量應(yīng)用的理想選擇。

經(jīng)典的微管蛋白聚合檢測使用340 nm處的吸光度讀數(shù)來跟蹤微管的形成。它基于這樣一個事實：微管散射光的程度與微管聚合物的濃度成正比。Cytoskeleton, Inc.提供這種基于吸光度的檢測（貨號BK006P）。

艾美捷Tubulin聚合檢測(熒光法96assays 豬腦微管蛋白)試劑盒（#BK011P）內(nèi)容：

試劑盒包含足夠進行96次50 ?L格式檢測的材料。包含以下組分：

>99%純度的微管蛋白（貨號T240）

含熒光報告分子的通用微管蛋白緩沖液

微管甘油緩沖液（貨號BST05）

GTP溶液（貨號BST06）

紫杉醇陽性對照（貨號TXD01）

半面積96孔板。黑色，平底

詳細的操作手冊和廣泛的故障排除指南

Tubulin聚合檢測(熒光法96assays 豬腦微管蛋白)試劑盒用途包括：

1成本效益高的抗癌化合物高通量篩選。

2基礎(chǔ)研究，用于測定化合物對微管蛋白的IC50值和特異性。

3篩選對微管蛋白聚合活性有影響的蛋白質(zhì)。

4作為藥理學(xué)本科/研究生課程的教學(xué)輔助工具。

所需設(shè)備：配備340-360 nm激發(fā)濾光片和420-450 nm發(fā)射濾光片的溫控96孔板熒光光度計

示例結(jié)果：

與微管蛋白相互作用的化合物或蛋白質(zhì)通常會改變聚合的一個或多個特征階段。例如，圖1顯示了向標準聚合反應(yīng)中加入抗有絲分裂藥物紫杉醇的效果。3 ?M濃度的紫杉醇消除了成核階段，并增強了生長階段的最大反應(yīng)速率（Vmax）。因此，本檢測的一個應(yīng)用是鑒定新型抗有絲分裂藥物。圖1還顯示了加入微管解聚藥物長春堿的效果。在3 ?M的最終濃度下，長春堿導(dǎo)致Vmax大幅下降和最終聚合物質(zhì)量減少。

圖1：使用基于熒光的微管蛋白聚合檢測（BK011P）進行的微管蛋白聚合。微管蛋白單獨孵育（對照組），或與紫杉醇或長春堿共同孵育。每種條件均進行雙份檢測。通過在360 nm處激發(fā)和在420 nm處發(fā)射來測量聚合。對照組聚合曲線的三個階段已標記：I. 成核；II. 生長；III. 穩(wěn)態(tài)平衡。

文獻參考：

Bonne, D., Heusele, C., Simon, C., and Pantaloni, D.  (1985).  4’, 6-Diamidino-2-phenylindole, a fluorescent probe for tubulin and mictrotubules. J. Biol. Chem. 260, 2819-2825.