Signal-Seeker? 產(chǎn)品系列的開(kāi)發(fā)旨在讓專(zhuān)業(yè)人士和非專(zhuān)業(yè)人士都能輕松分析關(guān)鍵調(diào)控蛋白的修飾。全面的 Signal-Seeker? 試劑盒提供了一種親和珠子系統(tǒng)，用于從任何給定的細(xì)胞或組織裂解液中分離和富集修飾蛋白。隨后，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的 Western blot 程序，使用針對(duì)目標(biāo)蛋白的一抗來(lái)分析富集的蛋白群體。

艾美捷Signal-Seeker 泛素化富集試劑盒(30次檢測(cè))（#BK161）用途包括：

研究瞬時(shí)調(diào)控機(jī)制  

測(cè)量多條信號(hào)通路成員蛋白的信號(hào)事件  

發(fā)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的新修飾  

洞察調(diào)控機(jī)制  

測(cè)量?jī)?nèi)源性或瞬時(shí)表達(dá)蛋白的信號(hào)事件   

實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例：

這些試劑盒有多種應(yīng)用（見(jiàn)下一部分），這里我們描述了一個(gè)關(guān)于 Rac1 蛋白的有趣應(yīng)用：

應(yīng)用 1：研究高度瞬時(shí)的調(diào)控事件  

Rho 家族蛋白（包括 Rac1）的活性已知部分通過(guò)泛素化（也稱(chēng)為泛素化修飾）事件進(jìn)行調(diào)控，這些事件可以通過(guò)修飾蛋白的降解和/或定位來(lái)調(diào)節(jié)信號(hào)通路（Visvikis, O. 等人，2010. Biol. Cell 102: 377-389；Nethe, M. 和 Hordijik, P. 2010. J. Cell Sci. 123: 4011-4018）。在許多情況下，Rac1 的 GTP 結(jié)合活性形式是泛素化的首選底物。例如，研究表明，用細(xì)菌毒素 CNF1 處理的細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致 Rac1 的持續(xù)激活以及隨后的單泛素化和多泛素化（Pop, M. 等人，2004. J. Biol. Chem. 279: 35840-35848）。

使用 Signal-Seeker? 泛素化檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：BK161），我們檢測(cè)了用 CNF1 毒素（貨號(hào)：CN04）處理的 3T3 細(xì)胞中內(nèi)源性 Rac1 的泛素化，并發(fā)現(xiàn)在 300 ug 的 3T3 細(xì)胞裂解液中可以檢測(cè)到 Rac1 的單泛素化和多泛素化。該試劑盒提供了一種用戶(hù)友好的工具，用于檢測(cè)任何目標(biāo)蛋白的單泛素化和多泛素化。

圖 1：Swiss 3T3 細(xì)胞預(yù)先用 MG-132 處理，然后未處理或用 CNF1（CN04）處理 3 小時(shí)，隨后用 BlastR 緩沖液裂解。利用 BK161 試劑盒對(duì)每種條件的 300 ?g 裂解液進(jìn)行免疫沉淀（IP）。泳道 1：3 ?g 未處理裂解液輸入；泳道 2：泛素親和珠子（UBA01）+ 未處理裂解液；泳道 3：UBA01 + CN04 處理的裂解液；泳道 4：泛素對(duì)照珠子（CUB02）+ 未處理裂解液；泳道 5：CUB02 + CN04 處理的裂解液。使用抗 Rac1 抗體檢測(cè) Rac1 的泛素化。

在這一研究領(lǐng)域可以嘗試的其他實(shí)驗(yàn)包括：  

泛素化酶或去泛素化酶在 Rac1 單泛素化和多泛素化中的藥理學(xué)研究  

在多種不同的生長(zhǎng)因子或藥物處理下，研究 Rac1 激活與泛素化之間的關(guān)系  

檢測(cè)泛素化 Rac1 與效應(yīng)蛋白的相互作用  

檢測(cè)泛素化 Rac1 與其他 Rac1 調(diào)控性翻譯后修飾（PTMs）之間的相互作用  

相關(guān)產(chǎn)品  

Signal-Seeker? 磷酸酪氨酸檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：BK160）  

Signal-Seeker? SUMOylation 2/3 檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：BK162）  

Signal-Seeker?：BlastR? 快速裂解液制備試劑盒（貨號(hào)：BLR01）  

Signal-Seeker? 泛素親和珠子（貨號(hào)：UBA01B-beads）  

Signal-Seeker?：PTMtrue? 泛素抗體（貨號(hào)：AUB01）