文獻(xiàn)標(biāo)題：The S100A8/A9 heterodimer amplifies proinflammatory cytokine production by macrophages via activation of nuclear factor kappa B and p38 mitogen-activated protein kinase in rheumatoid arthritis

DOI：10.1186/ar1939

研究背景

S100A8和S100A9是S100蛋白家族的兩個成員，它們在中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中以異二聚體復(fù)合物(S100A8/A9)的形式分泌。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)患者中，血清和滑液中的S100A8、S100A9和S100A8/A9水平較骨關(guān)節(jié)炎(OA)患者顯著升高，其中S100A8/A9異二聚體更為常見。S100A8/A9在RA的滑膜組織(ST)中主要由浸潤的CD68+巨噬細(xì)胞表達(dá)，并且與RA的炎癥活動和關(guān)節(jié)炎癥有關(guān)。

S100A8/A9異二聚體最初被鑒定為抗菌蛋白，在局部環(huán)境中表現(xiàn)出類似細(xì)胞因子的功能，特別是增強白細(xì)胞遷移到炎癥部位和促進(jìn)花生四烯酸(AA)向目標(biāo)細(xì)胞的運輸。然而，S100A8/A9的表面受體及其信號傳導(dǎo)途徑尚未完全闡明。S100A8/A9可能通過與肝素硫酸蛋白多糖和新型羧基化糖鏈等特定結(jié)合位點的相互作用，與內(nèi)皮細(xì)胞表面結(jié)合。此外，CD36和晚期糖基化終產(chǎn)品受體(RAGE)是該復(fù)合物的兩個可能的受體。

在RA患者中，炎癥滑膜的特征是炎癥細(xì)胞（主要是淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）的浸潤，滑膜成纖維細(xì)胞的增殖，以及血管增多。巨噬細(xì)胞在滑膜炎癥和關(guān)節(jié)破壞的持續(xù)中起著關(guān)鍵作用，主要通過分泌如腫瘤壞死因子α(TNF-α)和白介素1(IL-1)等促炎細(xì)胞因子。這些細(xì)胞因子通過激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)級聯(lián)反應(yīng)，誘導(dǎo)多種炎癥介質(zhì)和基質(zhì)降解酶的合成。

研究方法

1.滑膜組織細(xì)胞的分離和培養(yǎng)：新鮮ST樣本在RPMI 1640培養(yǎng)基中用膠原酶和DNase處理后，得到單細(xì)胞懸液，并在含有10%熱滅活胎牛血清(FCS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)72小時后收集培養(yǎng)上清液，并在-30°C下保存，直到進(jìn)行S100A8/A9檢測。

2.S100蛋白和細(xì)胞因子的免疫測定：使用商業(yè)ELISA試劑盒測定S100A8、S100A9和S100A8/A9的濃度。使用細(xì)胞計量珠陣列(CBA)和流式細(xì)胞儀分析測定單核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和IL-12 p70濃度。

3.雙色免疫熒光標(biāo)記：使用抗S100A8/A9抗體和抗CD68抗體對RA ST樣本進(jìn)行雙色免疫熒光標(biāo)記，以確定S100A8/A9在RA ST中的表達(dá)。

4.單核細(xì)胞和體外分化巨噬細(xì)胞的刺激：從健康個體的肝素化PB樣本中通過Ficoll-Hypaque密度梯度離心分離單個核細(xì)胞(PBMCs)，然后使用單核細(xì)胞分離試劑盒II從PBMCs中純化單核細(xì)胞。將單核細(xì)胞懸液在含有10% FCS的培養(yǎng)基中與或不與S100A8、S100A9和S100A8/A9共同孵育，并測定培養(yǎng)上清液中的細(xì)胞因子濃度。

5.RAGE和CD36阻斷對S100A8/A9刺激的影響：在含有多粘菌素B的條件下，單核細(xì)胞懸液與或不與抗RAGE抗體、esRAGE、抗CD36抗體共同孵育，以評估這些受體在S100A8/A9刺激中的作用。

6.MAPK抑制劑和NF-κB抑制劑對S100A8/A9刺激的影響：單核細(xì)胞在含有MAPK抑制劑或NF-κB激活抑制劑的條件下與S100A8/A9共同孵育，以評估這些信號通路在S100A8/A9誘導(dǎo)的細(xì)胞因子產(chǎn)生中的作用。

7.p38 MAPK激活的檢測：通過ELISA試劑盒測定單核細(xì)胞中p38 MAPK蛋白及其磷酸化形式的含量，以評估S100A8/A9對p38 MAPK激活的影響。

8.NF-κB激活的檢測：通過電泳遷移率變化分析(EMSA)測定單核細(xì)胞中NF-κB的DNA結(jié)合活性，以評估S100A8/A9對NF-κB激活的影響。

研究內(nèi)容

研究者發(fā)現(xiàn)在RA患者的血清和滑液中，S100A8、S100A9和S100A8/A9的水平較骨關(guān)節(jié)炎（OA）患者顯著升高，尤其是S100A8/A9異二聚體形式。通過免疫熒光技術(shù)，研究者觀察到S100A8/A9主要在RA患者的滑膜組織中的CD68+巨噬細(xì)胞中表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)S100A8/A9異二聚體和S100A9同源二聚體能夠刺激純化的單核細(xì)胞和體外分化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生如腫瘤壞死因子α（TNF-α）等促炎細(xì)胞因子。S100A8/A9介導(dǎo)的細(xì)胞因子產(chǎn)生被p38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制劑顯著抑制，且?guī)缀跬耆缓艘蜃应蔅（NF-κB）抑制劑抑制。這表明S100A8/A9通過激活NF-κB和p38 MAPK途徑在RA中放大促炎細(xì)胞因子反應(yīng)。來自RA患者的滑膜組織細(xì)胞在體外培養(yǎng)時自發(fā)分泌更多的S100A8/A9蛋白，這可能與RA患者關(guān)節(jié)內(nèi)巨噬細(xì)胞的激活狀態(tài)有關(guān)。探討了S100A8/A9在RA病理生理過程中的作用，包括其在炎癥細(xì)胞募集、花生四烯酸（AA）代謝以及與RA相關(guān)的信號通路激活中的角色。研究結(jié)果表明，S100A8/A9異二聚體可能是RA治療的一個潛在靶點，通過抑制其活性或阻斷其信號通路可能有助于減輕RA患者的炎癥反應(yīng)。這項研究為理解RA中的炎癥反應(yīng)提供了新的分子機制，并為開發(fā)新的治療策略提供了可能的方向

Calprotectin, Polyclonal, primary antibody 貨號：BMA-T-1526

抗體Calprotectin, Polyclonal, primary antibody在文獻(xiàn)中主要被用于兩個方面：

檢測S100A8/A9蛋白：Calprotectin是S100A8和S100A9形成的異二聚體的另一個名稱。在本文中，通過使用針對S100A8/A9復(fù)合物的多克隆抗體（例如，文中提到的27E10抗體），研究人員能夠通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和免疫熒光技術(shù)檢測RA患者血清和滑液中S100A8/A9的濃度。這些檢測有助于評估RA患者的疾病活動性和炎癥程度。

免疫熒光雙標(biāo)實驗：研究人員使用S100A8/A9的多克隆抗體和CD68的抗體進(jìn)行雙色免疫熒光標(biāo)記，以確定RA滑膜組織中S100A8/A9的表達(dá)位置和與CD68陽性巨噬細(xì)胞的共定位。這有助于揭示S100A8/A9在RA滑膜炎癥中的作用及其在滑膜組織中的細(xì)胞來源。

綜上所述，這些抗體在研究中扮演了關(guān)鍵角色，使研究人員能夠檢測和定位S100A8/A9蛋白，進(jìn)而分析其在RA中的潛在作用和作為生物標(biāo)志物的潛力。

抗體Calprotectin, Polyclonal, primary antibody，主要指的是針對Calprotectin（S100A8/A9異二聚體）的多克隆一抗，它們在多種研究和臨床應(yīng)用中具有重要作用。以下是這些抗體的一些主要應(yīng)用：

1.基礎(chǔ)研究：用于研究Calprotectin在細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)和病理學(xué)中的作用，特別是在炎癥和免疫反應(yīng)中的作用。

2.炎癥性疾病的診斷：檢測血清或組織樣本中的Calprotectin水平，以輔助診斷如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）、炎癥性腸病、感染性疾病等。

3.疾病監(jiān)測和治療反應(yīng)評估：監(jiān)測Calprotectin水平的變化，以評估疾病活動度和治療效果。

4.免疫組織化學(xué)：在組織切片上使用這些抗體來檢測Calprotectin的表達(dá)和定位，有助于理解其在病理過程中的作用。

5.流式細(xì)胞術(shù)：用于分析Calprotectin在不同細(xì)胞群中的表達(dá)，有助于研究其在免疫細(xì)胞功能中的角色。

6.ELISA檢測：用于定量測定生物樣本中的Calprotectin水平，常用于研究和臨床檢測。

7.免疫沉淀和Western blot：用于研究Calprotectin與其他蛋白質(zhì)的相互作用和信號傳導(dǎo)途徑。

8.藥物開發(fā)：在藥物篩選和開發(fā)過程中，用于驗證Calprotectin作為藥物靶點的潛力。

9.生物標(biāo)志物研究：評估Calprotectin作為疾病標(biāo)志物的潛力，以預(yù)測疾病風(fēng)險、預(yù)后和治療反應(yīng)。

10.研究Calprotectin的生理功能：例如，其在細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化和細(xì)胞死亡中的作用。

這些應(yīng)用體現(xiàn)了Calprotectin抗體在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床實踐中的應(yīng)用廣泛性。