一、產(chǎn)品概述

D - Dimer 是一種由纖維蛋白的兩個D片段通過交聯(lián)形成的蛋白質(zhì)，它是血液凝塊在纖溶過程中被降解產(chǎn)生的一種纖維蛋白降解產(chǎn)物（FDP）。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，D - Dimer 對于診斷彌漫性血管內(nèi)凝血（一種血液疾病）以及深靜脈血栓等病癥具有重要的臨床意義。本試劑盒專為定量檢測小鼠血漿中的纖維蛋白原 D - Dimer 蛋白而設(shè)計，適用于小鼠樣本的檢測。艾美捷作為Abbexa中國區(qū)代理商，為大家整理了一份鼠源D-Dimer ELISA試劑盒中文說明書。

二、Abbexa鼠源D-Dimer ELISA試劑盒（abx258705）組成：

本試劑盒基于競爭性酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）技術(shù)原理。其核心組成如下：

預(yù)包被的 96 孔微孔板：預(yù)先包被有特異性抗體，用于捕獲樣本中的 D - Dimer。

標(biāo)準(zhǔn)品：用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以定量分析樣本中的 D - Dimer 含量。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液：用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以獲得不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列。

洗滌緩沖液：用于在各步驟中清洗微孔板，去除未結(jié)合的成分，減少背景干擾。

檢測試劑 A：生物素標(biāo)記的試劑，參與競爭反應(yīng)。

檢測試劑 B：辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的試劑，用于信號放大。

稀釋液 A 和稀釋液 B：分別用于稀釋檢測試劑 A 和檢測試劑 B，確保其在合適的工作濃度下發(fā)揮作用。

TMB 底物：用于顯色反應(yīng)，其顏色變化與 D - Dimer 的含量呈反比關(guān)系。

終止液：用于終止反應(yīng)，使顏色變化固定，便于在特定波長下測量吸光度。

封板膜：用于在反應(yīng)過程中封閉微孔板，防止蒸發(fā)和交叉污染。

此外，進(jìn)行實驗還需要準(zhǔn)備一些未提供的材料，如 37℃恒溫箱、多道和單道移液管及無菌移液頭、洗瓶或自動微孔板清洗器、1.5ml 離心管、蒸餾水、吸水濾紙、100ml 和 1 升量筒、微孔板讀數(shù)儀（波長：450nm）以及 ELISA 振蕩器。

三、實驗原理

本試劑盒采用競爭性 ELISA 技術(shù)。預(yù)先在 96 孔板上包被有特異性抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品、測試樣本和生物素偶聯(lián)試劑加入到孔中并孵育，生物素標(biāo)記的 D - Dimer 與未標(biāo)記的 D - Dimer 之間會在預(yù)包被抗體上發(fā)生競爭性抑制反應(yīng)。隨后加入 HRP 偶聯(lián)試劑，并再次孵育。在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的偶聯(lián)物。使用 TMB 底物來定量 HRP 酶促反應(yīng)。加入 TMB 底物后，只有含有足夠 D - Dimer 的孔才會產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，加入酸性終止液后會變?yōu)辄S色。黃色的強(qiáng)度與結(jié)合在板上的 D - Dimer 量成反比。在微孔板讀數(shù)儀上以 450nm 波長光譜光度法測量 OD 值，從而可以計算出 D - Dimer 的濃度。

四、試劑準(zhǔn)備

1.標(biāo)準(zhǔn)品：按照說明書推薦的體積，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液。然后按照協(xié)議中的指示，使用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液對標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行連續(xù)稀釋。

2.洗滌緩沖液：按照協(xié)議中的指示，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3.檢測試劑準(zhǔn)備：計算所需的工作溶液體積。分別用稀釋液 A 和稀釋液 B 按 1：100 的比例稀釋檢測試劑 A 和檢測試劑 B。

五、實驗步驟

1.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)、測試樣本和對照孔：在預(yù)包被的微孔板上分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔、測試樣本孔和對照（零）孔，并記錄它們的位置。建議每個標(biāo)準(zhǔn)和樣本至少進(jìn)行雙份測量。

2.加樣：向標(biāo)準(zhǔn)孔中加入 50uL 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品，向?qū)φ眨悖┛字屑尤?nbsp;50uL 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液，向樣本孔中加入 50uL 稀釋后的樣本。

3.加入檢測試劑 A：立即向每個孔中加入 50uL 檢測試劑 A 工作溶液。用封板膜封住微孔板，在 37℃下孵育 1 小時。

4.洗滌：移除封板膜，棄去溶液。用 1X 洗滌緩沖液洗滌微孔板 3 次。

5.加入檢測試劑 B：向每個孔中加入 100uL 檢測試劑 B 工作溶液，封板后在 37℃下孵育 30 分鐘。

6.再次洗滌：棄去溶液，用洗滌緩沖液按前一步驟所述方法洗滌微孔板 5 次。

7.加入 TMB 底物：向每個孔中加入 90uL TMB 底物。用封板膜封住微孔板，在 37℃下孵育 10 - 20 分鐘。避免光照。孵育時間僅供參考，最佳時間應(yīng)由最終用戶確定。不要超過 30 分鐘。

8.加入終止液：向每個孔中加入 50uL 終止液。立即在 450nm 波長下讀取吸光度。

六、結(jié)果計算

本實驗為競爭性實驗，因此樣本中 D - Dimer 的濃度與其測量的吸光度呈反比關(guān)系。創(chuàng)建一個以標(biāo)準(zhǔn)濃度的對數(shù)（y 軸）和平均吸光度（x 軸）為坐標(biāo)的圖表。通過標(biāo)準(zhǔn)點繪制最佳擬合趨勢線。可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上插值計算出樣本中 D - Dimer 的濃度。

七、實驗精密度

1.批內(nèi)精密度（同一批次內(nèi)的精密度）：對低、中、高三個水平的 D - Dimer 樣本進(jìn)行 20 次測試，均在同一塊微孔板上進(jìn)行。變異系數(shù)（CV%）=（標(biāo)準(zhǔn)差/平均值）× 100。批內(nèi)精密度：CV < 10%。

2.批間精密度（不同批次之間的精密度）：對低、中、高三個水平的 D - Dimer 樣本在 3 塊不同的微孔板上進(jìn)行測試，每塊微孔板上各有 8 個重復(fù)樣本。批間精密度：CV < 12%。

八、注意事項

1.僅用于研究目的：本產(chǎn)品僅供研究使用，不得用于診斷或治療用途。

2.范圍和靈敏度可能發(fā)生變化：范圍和靈敏度可能會發(fā)生變化。

3.樣本濃度要求：為獲得準(zhǔn)確結(jié)果，樣本濃度必須稀釋至試劑盒的中等范圍內(nèi)。

4.樣本類型優(yōu)化：請注意，Abbexa的試劑盒針對天然樣本的檢測進(jìn)行了優(yōu)化，而不是重組蛋白。Abbexa無法保證檢測重組蛋白，因為它們可能具有與天然蛋白不同的序列或三級結(jié)構(gòu)。

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