針對(duì)含有單甲基化賴(lài)氨酸4的組蛋白H3（H3K4me1）的多克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。  

作為BPS Bioscience在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷(xiāo)產(chǎn)品Anti-H3K4me1多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K4me1多克隆抗體：

克隆性：多克隆  

宿主物種/表達(dá)系統(tǒng)：兔  

純化方法：親和純化  

形式：水溶液緩沖液  

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS溶液  

濃度：50 ?g/18 ?l  

免疫原：合成肽  

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性  

在–80°C下可保存長(zhǎng)達(dá)2年。首次解凍后離心以最大化產(chǎn)品回收。分裝以避免反復(fù)凍融循環(huán)。分裝可在–20°C下保存至少一個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)條件  

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）結(jié)果  

使用針對(duì)H3K4me1的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25253）對(duì)100萬(wàn)HeLaS3細(xì)胞的剪切染色質(zhì)進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中使用1 ?g、2 ?g、5 ?g和10 ?g的抗體進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)分析。以2 ?g IgG作為陰性免疫沉淀（IP）對(duì)照。通過(guò)定量PCR（qPCR）分析，使用特異性引物檢測(cè)ACTB和GAS2L1基因周?chē)膮^(qū)域（作為陽(yáng)性對(duì)照）以及GAPDH和EIF4A2基因的啟動(dòng)子（作為陰性對(duì)照）。圖1顯示了回收率，以輸入DNA的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對(duì)量）。

染色質(zhì)免疫沉淀測(cè)序（ChIP-seq）結(jié)果  

如上所述，使用1 ?g針對(duì)H3K4me1的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25253）進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）。隨后，免疫沉淀的DNA在Illumina基因組分析儀上進(jìn)行分析。文庫(kù)制備、簇生成和測(cè)序均按照制造商的說(shuō)明進(jìn)行。使用ELAND算法將36 bp標(biāo)簽與人類(lèi)基因組對(duì)齊。圖2A和B展示了圍繞ACTB和GAS2L1陽(yáng)性對(duì)照基因的染色體區(qū)域的富集情況。用于qPCR驗(yàn)證的擴(kuò)增子位置用箭頭表示。圖2C和D分別展示了5號(hào)染色體和X染色體兩個(gè)1 Mb區(qū)域的H3K4me1信號(hào)。

滴度測(cè)定  

通過(guò)ELISA實(shí)驗(yàn)測(cè)定抗體滴度，使用針對(duì)H3K4me1的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25253）的系列稀釋液，并在抗原包被的孔中進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)中使用的抗原是含有目標(biāo)組蛋白修飾的肽段。通過(guò)繪制抗體稀釋度與吸光度的關(guān)系圖（圖3），估算抗體的滴度為1:20,100。

交叉反應(yīng)性測(cè)試  

通過(guò)點(diǎn)樣（Dot Blot）分析測(cè)試針對(duì)H3K4me1的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25253）與其他組蛋白H3和H4的修飾或未修飾序列的交叉反應(yīng)性。將含有相應(yīng)修飾的肽段（100至0.2 pmol）點(diǎn)樣于膜上，抗體稀釋度為1:10,000。圖4顯示該抗體對(duì)目標(biāo)修飾具有高度特異性。

Western Blot分析  

對(duì)HeLa細(xì)胞的全細(xì)胞提取物（25 ?g，泳道1）和組蛋白提取物（15 ?g，泳道2）以及1 ?g的重組組蛋白H2A、H2B、H3和H4（分別對(duì)應(yīng)泳道3、4、5和6）進(jìn)行Western Blot分析，使用針對(duì)H3K4me1的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25253）。抗體稀釋度為1:500，使用含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween緩沖液。右側(cè)標(biāo)記了目標(biāo)蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標(biāo)記（單位：kDa）。

應(yīng)用  

- 染色質(zhì)免疫沉淀/染色質(zhì)免疫沉淀測(cè)序（ChIP/ChIP-seq）：1 – 2 ?g/ChIP  

- 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：1:500  

- 點(diǎn)樣（Dot Blot，DB）：1:10,000  

- Western Blot（WB）：1:500  

運(yùn)輸溫度：–20°C或–80°C  

物種反應(yīng)性：人  

注意事項(xiàng)：每IP的最佳抗體用量應(yīng)由最終用戶(hù)確定。建議測(cè)試1–5 ?g/IP。  

警告：避免反復(fù)凍融循環(huán)。  

科學(xué)分類(lèi)：抗體  

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過(guò)ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開(kāi)發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、新型冠狀病毒、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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