針對含有雙甲基化賴氨酸4的組蛋白H3（H3K4me2）的多克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品Anti-H3K4me2多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K4me2多克隆抗體：

克隆性：多克隆  

宿主物種/表達系統(tǒng)：兔  

純化方法：親和純化  

形式：水溶液緩沖液  

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS溶液  

濃度：50 ?g/42 ?l  

免疫原：合成肽  

儲存/穩(wěn)定性  

在–80°C下可保存長達2年。首次解凍后離心以最大化產(chǎn)品回收。分裝以避免反復凍融循環(huán)。分裝可在–20°C下保存至少一個月。

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）結(jié)果  

使用針對H3K4me2的抗體（產(chǎn)品編號25255）對100萬HeLaS3細胞的剪切染色質(zhì)進行染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實驗。實驗中使用1 ?g、2 ?g、5 ?g和10 ?g的抗體進行梯度實驗分析。以2 ?g IgG作為陰性免疫沉淀（IP）對照。通過定量PCR（qPCR）分析，使用特異性引物檢測活性GAPDH基因的啟動子和編碼區(qū)、活性c-fos基因的啟動子以及非活性TSH2B基因的編碼區(qū)。圖1顯示了回收率，以輸入DNA的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對量）。

染色質(zhì)免疫沉淀測序（ChIP-seq）結(jié)果  

如上所述，使用1 ?g針對H3K4me2的抗體（產(chǎn)品編號25255）進行染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）。免疫沉淀的DNA在Illumina基因組分析儀上進行分析。文庫制備、簇生成和測序均按照制造商的說明進行。使用ELAND算法將36 bp標簽與人類基因組對齊。圖2展示了完整的X染色體上的峰值分布（圖2A）以及圍繞GAPDH、c-fos和ACTB基因的3個染色體區(qū)域的分布（圖2B、C和D，分別）。

滴度測定  

通過ELISA實驗測定抗體滴度，使用針對H3K4me2的抗體（產(chǎn)品編號25255）的系列稀釋液、粗制血清和流穿液，并在抗原包被的孔中進行檢測。實驗中使用的抗原是含有目標組蛋白修飾的肽段。通過繪制抗體稀釋度與吸光度的關系圖（圖3），估算抗體的滴度為1:12,600。

交叉反應性測試  

通過點樣（Dot Blot）分析測試針對H3K4me2的抗體（產(chǎn)品編號25255）與其他組蛋白H3和H4的修飾以及未修飾H3K4序列的交叉反應性。將含有相應修飾的肽段（100至0.2 pmol）點樣于膜上，抗體稀釋度為1:20,000。圖4顯示該抗體對目標修飾具有高度特異性。

Western Blot分析  

對HeLa細胞的組蛋白提取物（15 ?g）進行Western Blot分析，使用針對H3K4me2的抗體（產(chǎn)品編號25255）。抗體稀釋度為1:1,000，使用含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween緩沖液。右側(cè)標記了目標蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標記（單位：kDa）。

免疫熒光實驗  

使用針對H3K4me2的抗體（產(chǎn)品編號25255）和DAPI對人骨肉瘤（U2OS）細胞進行染色。細胞用4%甲醛固定20分鐘，并用含有5%正常山羊血清的PBS/TX-100進行封閉。  

圖6A：細胞用H3K4me2抗體（左側(cè)）以1:5,000的比例稀釋在封閉液中進行免疫熒光標記，隨后使用與Alexa568偶聯(lián)的抗兔抗體進行二抗標記，或用DAPI（右側(cè)）進行染色，特異性標記DNA。  

圖6B、C、D和E：分別在抗體與含有未修飾以及單甲基化、雙甲基化和三甲基化H3K4的阻斷肽（5 ng/?l）孵育后，對細胞進行H3K4me2抗體染色。

應用  

- 染色質(zhì)免疫沉淀/染色質(zhì)免疫沉淀測序（ChIP/ChIP-seq）：5 ?g/ChIP  

- 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：1:500  

- 點樣（Dot Blot，DB）：1:20,000  

- Western Blot（WB）：1:1000  

- 免疫熒光（IF）：1:5000  

運輸溫度：–20°C或–80°C  

物種反應性：人  

注意事項：每IP的最佳抗體用量應由最終用戶確定。建議測試1–5 ?g/IP。  

警告：避免反復凍融循環(huán)。  

科學分類：抗體  

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉(zhuǎn)導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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