OX40/NF-κB熒光素酶報(bào)告基因HEK293細(xì)胞系是一種表達(dá)由NF-κB（核因子κB）響應(yīng)元件控制的螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因的HEK293細(xì)胞系，以及表達(dá)OX-40（腫瘤壞死因子受體超家族成員4，GenBank登錄號(hào)NM_003327）。

該細(xì)胞系已通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)以及OX40L和抗OX40拮抗抗體進(jìn)行了驗(yàn)證。

圖1：OX40/NF-κB熒光素酶報(bào)告基因HEK293細(xì)胞系的作用機(jī)制圖示。

背景：

OX40，也稱(chēng)為CD134，是一種共刺激受體，屬于腫瘤壞死因子（TNF）受體家族，表達(dá)在T細(xì)胞表面。OX40與其配體OX40L（也稱(chēng)為CD252）結(jié)合，可以增強(qiáng)T細(xì)胞的激活、分化、增殖、存活和T細(xì)胞效應(yīng)功能。OX40L存在于NK細(xì)胞中，參與它們的激活和細(xì)胞毒性特征，以及樹(shù)突狀細(xì)胞中。OX40可以與TRAF（TNFR相關(guān)因子）家族蛋白成員結(jié)合，這些蛋白隨后可以調(diào)節(jié)NF-κB（核因子κB）信號(hào)通路。OX40和OX40L可以在癌細(xì)胞中找到，如AML（急性髓細(xì)胞性白血病）和乳腺癌細(xì)胞。研究表明，OX40激動(dòng)劑可以增加抗腫瘤免疫并改善前臨床研究中的無(wú)瘤存活。或者，OX40拮抗劑作為治療炎癥性疾病的潛在藥物。開(kāi)發(fā)新的OX40/OX40L活性調(diào)節(jié)劑是治療實(shí)體瘤或自身免疫性疾病患者的有希望的治療方法。

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應(yīng)用：

- 表征OX40活性及其與配體的結(jié)合。

- 在細(xì)胞模型中篩選調(diào)節(jié)OX40信號(hào)的化合物。

細(xì)胞培養(yǎng)協(xié)議：

注意：HEK293細(xì)胞源自人類(lèi)材料，因此建議采取適當(dāng)?shù)陌踩A(yù)防措施。

細(xì)胞解凍：

1. 在37°C水浴中旋轉(zhuǎn)冷凍細(xì)胞瓶大約60秒。細(xì)胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中的內(nèi)容轉(zhuǎn)移到含有10毫升預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1的管中。

注意：在37°C水浴中放置細(xì)胞太久會(huì)導(dǎo)致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在5毫升預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1中重懸細(xì)胞。

3. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時(shí)后，檢查細(xì)胞附著和活力。更換為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好傳代。

5. 細(xì)胞應(yīng)在完全融合前傳代。在第一次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長(zhǎng)培養(yǎng)基1A。

細(xì)胞傳代：

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無(wú)Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05% Trypsin/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基1A并轉(zhuǎn)移到管中。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在生長(zhǎng)培養(yǎng)基1A中重懸細(xì)胞。

4. 按照推薦的次培養(yǎng)比例1:10每周一次或兩次將細(xì)胞種植到新的培養(yǎng)容器中。

細(xì)胞冷凍：

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無(wú)Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細(xì)胞，并用0.05% Trypsin/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基1A并計(jì)數(shù)細(xì)胞。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在4°C細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸細(xì)胞，細(xì)胞濃度約為2 x 10^6細(xì)胞/ml。

4. 將1毫升的細(xì)胞懸浮液分裝到每個(gè)冷凍瓶中。將瓶子放入絕緣容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過(guò)夜保存。

5. 次日將瓶子轉(zhuǎn)移到液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期存儲(chǔ)。

注意：建議擴(kuò)展細(xì)胞并在早期傳代時(shí)至少冷凍10瓶細(xì)胞以備將來(lái)使用。

數(shù)據(jù)示例：

圖

圖：OX40/NF-κB熒光素酶報(bào)告基因HEK293細(xì)胞系中OX40的細(xì)胞表面表達(dá)。

OX40/NF-κB熒光素酶報(bào)告基因HEK293細(xì)胞（藍(lán)色）和對(duì)照HEK293細(xì)胞（紅色）用抗OX40抗體，PE標(biāo)記（#72064）染色，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析。Y軸代表細(xì)胞數(shù)量百分比。X軸表示PE強(qiáng)度。

文獻(xiàn)參考：

Peng K., et al., 2014 AAPS J. 16(4): 625–633.

Marconato M., et al., 2022 Scientific Reports 12: 15856

BPS Bioscience是一家通過(guò)ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開(kāi)發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、新型冠狀病毒、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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