STAT3報告基因（eGFP）-HEK293細胞系旨在監(jiān)測STAT3信號轉(zhuǎn)導途徑。它包含一個由位于最小TATA啟動子上游的STAT3響應元件驅(qū)動的eGFP基因。在細胞因子和生長因子激活后，內(nèi)源性STAT3結(jié)合到DNA響應元件上，誘導eGFP報告基因的轉(zhuǎn)錄。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品STAT3 報告基因（eGFP）-HEK293 細胞系。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應用

? 監(jiān)測STAT3信號通路活性

? 篩選STAT3信號通路的激活劑或抑制劑

細胞培養(yǎng)協(xié)議

細胞解凍

1. 為了解凍細胞，建議將液氮中的冷凍細胞快速在37°C水浴中解凍，然后將瓶中全部內(nèi)容轉(zhuǎn)移到含有10毫升解凍培養(yǎng)基1（不含普魯霉素）的管中。

2. 離心細胞，去除上清液，并在5毫升預熱的解凍培養(yǎng)基1（不含普魯霉素）中重新懸浮細胞。

3. 將重新懸浮的細胞轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 細胞應在完全融合前進行傳代。在首次傳代時，轉(zhuǎn)換為生長培養(yǎng)基1N（含普魯霉素）。

細胞傳代

1. 傳代細胞時，去除培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并使用0.05%胰酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 分離后，加入生長培養(yǎng)基1N（含普魯霉素），轉(zhuǎn)移到管中，離心細胞，重新懸浮細胞在生長培養(yǎng)基1N中，并將適量的細胞懸浮液種植到新的培養(yǎng)容器中。傳代比例：每周或每兩周1:5至1:10。

細胞冷凍

1. 冷凍細胞時，去除培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并使用0.05%胰酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 分離后，加入解凍培養(yǎng)基1（不含普魯霉素）并計數(shù)細胞，然后轉(zhuǎn)移到管中，離心細胞，并在4°C冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重新懸浮，細胞濃度約為2 x 10^6細胞/ml。

3. 將1毫升的細胞懸浮液分裝到冷凍管中。將管放入絕緣容器中緩慢冷卻，并在-80°C下保存過夜。

4. 次日轉(zhuǎn)移到液氮中保存。

驗證數(shù)據(jù)

通過抗IL-6R抗體抑制IL-6誘導的STAT3活性

1. 收集STAT3報告基因（eGFP）-HEK293細胞，并在80微升細胞培養(yǎng)基中以每孔20,000細胞的密度種植到白色透明底96孔微孔板中。在37°C、5% CO2條件下過夜培養(yǎng)細胞。

2. 次日，在將被IL6刺激的孔中加入所需濃度的抗IL-6R抗體（R&D Systems, #MAB227）10微升（最終抗IL-6R抗體濃度= 2-20納摩爾）。在37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)細胞一小時。對于未經(jīng)抗體處理的對照細胞，加入10微升新鮮培養(yǎng)基。

3.

a. 在標記為“IL6-stimulated”的孔中加入稀釋的人IL-6 10微升（最終IL-6濃度= 2納克/毫升）。

b. 在未刺激的對照孔中加入10微升培養(yǎng)基（用于確定未刺激的報告基因活性）。

4. 在37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)細胞24-48小時。

5. 在熒光顯微鏡下觀察eGFP的表達（激發(fā)/發(fā)射=488/510納米）。

圖1. 抗IL-6R抗體在STAT3（eGFP）報告基因HEK293細胞中抑制IL-6誘導的報告基因活性。

相關(guān)產(chǎn)品：

Products Catalog # Size

STAT3 Luciferase Reporter Lentivirus 79744 2 x 500 ?l

STAT3 eGFP Reporter Lentivirus 78197 2 x 500 ?l

STAT3 Reporter Kit (STAT3 Signaling Pathway) 79730 500 rxns.

STAT3 Reporter (Luc)-HEK293 Cell line 79800-P 2 vials

Thaw Medium 1 60187-1 100 ml

Growth Medium 1N 79801 500 ml

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