CD36 HEK293細胞系是一種克隆的HEK293細胞系，穩(wěn)定表達全長人CD36。與母體HEK293細胞系相比，選擇了兩種細胞系以獲得中等和高水平的CD36表達。

背景

CD36（分化簇36）也被稱為血小板糖蛋白4、脂肪酸轉運蛋白（FAT）、清道夫受體B類成員3（SCARB3）和糖蛋白88（GP88）。它在多種細胞類型中表達，包括紅細胞、單核細胞、分化的脂肪細胞、骨骼肌細胞、乳腺和腸道上皮細胞以及內皮細胞。CD36是血小板表面存在的主要糖蛋白之一。

CD36具有復雜的生物功能，具體取決于細胞類型和配體。CD36是基質蛋白（如膠原蛋白、纖維連接蛋白和血小板反應蛋白）的糖蛋白受體，作為粘附分子發(fā)揮作用。它與血小板反應蛋白的結合有助于血管生物學和血管生成，同時也能結合氧化磷脂、低密度脂蛋白、脂蛋白和長鏈脂肪酸等脂質。配體誘導的CD36簇的形成啟動信號轉導和受體-配體復合物的內吞作用。CD36通過將其脂質配體導入細胞并促進長鏈脂肪酸的細胞攝取，調節(jié)細胞的脂肪酸代謝，從而參與肌肉代謝、脂肪細胞中的能量儲存以及腸道中膳食脂肪的處理。

CD36與多種涉及免疫和血管系統(tǒng)的疾病相關，并且在脂質代謝重要的疾病中，如糖尿病和肥胖、炎癥、動脈粥樣硬化、心臟病和阿爾茨海默病等。此外，由于脂質是腫瘤細胞的重要能量來源，CD36與癌癥相關。因此，在多種癌癥類型中觀察到CD36表達上調，并與不良臨床結果相關。最后，CD36通過介導受寄生蟲感染的紅細胞與瘧疾相關的粘附能力，參與瘧疾的發(fā)生。

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應用

- 鑒定針對CD36的抗體。

- 篩選抑制劑或中和抗體對CD36的結合。

細胞培養(yǎng)協(xié)議

細胞復蘇

1. 從液氮儲存中取出細胞瓶，保持在干冰上，直到準備復蘇。

2. 當準備復蘇時，將冷凍細胞瓶在37°C水浴中旋轉約60秒。一旦細胞復蘇（可能會稍快或稍慢于60秒），迅速將瓶內全部內容物轉移到一個空的50毫升錐形管中。

注意：在37°C水浴中放置細胞時間過長會導致細胞活力迅速下降。

3. 使用10毫升血清移液管，緩慢向含有細胞的錐形管中加入10毫升預熱的復蘇培養(yǎng)基1。復蘇培養(yǎng)基1應逐滴加入，同時輕輕搖動錐形管以促進混合，避免滲透壓沖擊。

4. 立即以300 x g離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并將細胞重懸于5毫升預熱的復蘇培養(yǎng)基1中。

5. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育。

6. 培養(yǎng)24小時后，檢查細胞附著和活力。更換為新鮮的復蘇培養(yǎng)基1，并繼續(xù)在37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細胞準備分裂。

7. 在細胞完全融合之前應進行傳代。在第一次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1V。

細胞傳代

1. 吸去培養(yǎng)基，用不含Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）洗滌細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 細胞分離后，加入生長培養(yǎng)基1V并轉移到管中。

3. 以300 x g離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并將細胞重懸于生長培養(yǎng)基1V中。

4. 按推薦的亞培養(yǎng)比例1:6至1:8每周或每周兩次播種到新的培養(yǎng)容器中。

細胞冷凍

1. 吸去培養(yǎng)基，用不含Ca2+/Mg2+的PBS洗滌細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 細胞分離后，加入生長培養(yǎng)基1V并計數細胞。

3. 以300 x g離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并將細胞重懸于4°C細胞冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中，濃度約為2 x 10^6細胞/ml。

4. 將1毫升細胞懸液分配到每個冷凍管中。將冷凍管放入絕緣容器中以慢速冷卻，并在-80°C下存放過夜。

5. 第二天將冷凍管轉移到液氮中進行長期儲存。

注意：建議在早期傳代擴展細胞并冷凍至少10個冷凍管以備將來使用。

圖1：CD36 HEK293細胞系中CD36的細胞表面表達。

一百萬個細胞用5 ?l PE標記的抗CD36抗體（BioLegend #336206）在冰上染色30分鐘，洗滌三次，并通過流式細胞儀分析。CD36 HEK293細胞系高表達細胞（藍色）和中等表達細胞（紅色）與母體HEK293細胞（綠色）進行比較。Y軸表示細胞計數，X軸表示PE強度。

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