CD36 HEK293細(xì)胞系是一種穩(wěn)定表達(dá)全長人類CD36的克隆HEK293細(xì)胞系。與親本HEK293細(xì)胞系相比，選擇了兩種細(xì)胞系，分別具有中等和高水平的CD36表達(dá)。

背景

CD36（分化簇36）也被稱為血小板糖蛋白4、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（FAT）、清道夫受體B類成員3（SCARB3）和糖蛋白88（GP88）。它在許多細(xì)胞類型中表達(dá)，包括紅細(xì)胞、單核細(xì)胞、分化的脂肪細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺和腸道上皮細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞。CD36是血小板表面存在的主要糖蛋白之一。

CD36具有復(fù)雜的生物學(xué)功能，這取決于細(xì)胞類型和配體。CD36是基質(zhì)蛋白（如膠原蛋白、纖維連接蛋白和血小板反應(yīng)蛋白）的糖蛋白受體，作為粘附分子。它與血小板反應(yīng)蛋白的結(jié)合有助于血管生物學(xué)和血管生成，并且它還結(jié)合脂質(zhì)，如氧化磷脂和低密度脂蛋白、脂蛋白和長鏈脂肪酸。配體誘導(dǎo)的CD36簇的形成啟動(dòng)了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和受體-配體復(fù)合物的內(nèi)化。CD36通過將脂質(zhì)配體導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，并通過促進(jìn)細(xì)胞對長鏈脂肪酸的攝取，調(diào)節(jié)細(xì)胞的脂肪酸代謝，從而參與肌肉代謝、脂肪細(xì)胞中的能量儲(chǔ)存以及腸道中膳食脂肪的處理。

CD36涉及多種涉及免疫和血管系統(tǒng)的疾病，以及脂質(zhì)代謝重要的疾病，如糖尿病和肥胖、炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化、心臟病和阿爾茨海默病。此外，由于脂質(zhì)是腫瘤細(xì)胞的重要能量來源，CD36與癌癥相關(guān)。因此，在多種癌癥類型中觀察到CD36表達(dá)上調(diào)，并與不良臨床結(jié)果相關(guān)。最后，它通過介導(dǎo)由寄生蟲引起的疾病，瘧原蟲（Plasmodium falciparum）感染的紅細(xì)胞的粘附能力，在瘧疾中發(fā)揮作用。

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應(yīng)用

? 對抗CD36的抗體的特性鑒定。

? 篩選抑制劑或中和抗體對CD36的結(jié)合。

細(xì)胞培養(yǎng)協(xié)議

細(xì)胞復(fù)蘇

1. 從液氮儲(chǔ)存中取出細(xì)胞瓶。在準(zhǔn)備解凍前，將其保持在干冰上。

2. 準(zhǔn)備解凍時(shí)，將裝有冷凍細(xì)胞的瓶子在37°C水浴中旋轉(zhuǎn)大約60秒。一旦細(xì)胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶內(nèi)的全部內(nèi)容轉(zhuǎn)移到一個(gè)空的50毫升錐形管中。

注意：在37°C水浴中放置細(xì)胞時(shí)間過長會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活力迅速下降。

3. 使用10毫升血清移液管，緩慢向含有細(xì)胞的錐形管中加入10毫升預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1。解凍培養(yǎng)基1應(yīng)逐滴加入，同時(shí)輕輕搖動(dòng)錐形管以實(shí)現(xiàn)溫和混合，避免滲透沖擊。

4. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并將細(xì)胞在5毫升預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1中重懸。

5. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6. 培養(yǎng)24小時(shí)后，檢查細(xì)胞附著和活力。更換為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并繼續(xù)在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好分裂。

7. 在細(xì)胞完全融合之前應(yīng)進(jìn)行傳代。在第一次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1V。

細(xì)胞傳代

1. 吸去培養(yǎng)基，用不含Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌細(xì)胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基1V并轉(zhuǎn)移到管中。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并將細(xì)胞在生長培養(yǎng)基1V中重懸。

4. 按推薦的亞培養(yǎng)比例1:6至1:8每周或每周兩次播種到新的培養(yǎng)容器中。

細(xì)胞冷凍

1. 吸去培養(yǎng)基，用不含Ca2+/Mg2+的PBS洗滌細(xì)胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基1V并計(jì)數(shù)細(xì)胞。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并將細(xì)胞在4°C細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸，濃度約為2 x 10^6細(xì)胞/毫升。

4. 將1毫升細(xì)胞懸液分配到每個(gè)冷凍管中。將管放入絕緣容器中進(jìn)行慢速冷卻，并在-80°C下過夜儲(chǔ)存。

5. 次日將管轉(zhuǎn)移到液氮中進(jìn)行長期儲(chǔ)存。

注意：建議在早期傳代擴(kuò)展細(xì)胞并至少冷凍10個(gè)管以備將來使用。

圖1：CD36 HEK293細(xì)胞系中CD36的細(xì)胞表面表達(dá)。

一百萬個(gè)細(xì)胞用5微升PE偶聯(lián)的抗CD36抗體（BioLegend #336206）在冰上染色30分鐘，洗滌三次，并通過流式細(xì)胞儀分析。CD36 HEK293細(xì)胞系高表達(dá)細(xì)胞（藍(lán)色）和中等表達(dá)細(xì)胞（紅色）與親本HEK293細(xì)胞（綠色）進(jìn)行比較。Y軸代表細(xì)胞計(jì)數(shù)。X軸表示PE強(qiáng)度。

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、新型冠狀病毒、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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