GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 是一種經(jīng)過工程改造的 HEK293 細(xì)胞系，表達(dá)由 cAMP 反應(yīng)元件（CRE）控制的螢火蟲熒光素酶，以及人類 GIPR（胃抑制多肽受體；NM_000164.4）。可以通過測(cè)量熒光素酶活性來監(jiān)測(cè)這些細(xì)胞中 GIPR 的激活。GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 的功能性已在使用胃抑制多肽（GIP）、Tirzepatide 和 Retatrutide 等激動(dòng)劑的劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證。這些激動(dòng)劑以劑量依賴性方式誘導(dǎo)熒光素酶活性，如圖 1 所示。

圖 1. GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 中作用機(jī)制的示意圖。

背景

胃抑制多肽受體（GIPR），也稱為葡萄糖依賴性胰島素促進(jìn)多肽受體，屬于 B1 類 G 蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）家族。GIPR 主要存在于胰腺的 β-細(xì)胞中，作為胃抑制多肽（GIP）激素的受體。作為腸促胰島素激素之一，GIP 通過刺激胰腺 β-細(xì)胞釋放胰島素來調(diào)節(jié)葡萄糖代謝。由于 GIPR/GLP-1R 異源二聚體化調(diào)節(jié) GLP-1R 信號(hào)傳導(dǎo)，同時(shí)結(jié)合 GIPR 和 GLP-1R 的雙重激動(dòng)劑已顯示出治療 II 型糖尿病（T2DM）和肥胖癥的臨床療效。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品GIPR/CRE 熒光素酶報(bào)告基因 HEK293 細(xì)胞系。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應(yīng)用（用途）

在細(xì)胞模型中篩選和表征人類 GIPR 的激動(dòng)劑。

細(xì)胞解凍

1. 在 37°C 水浴中搖晃裝有冷凍細(xì)胞的小瓶大約 60 秒。細(xì)胞一旦解凍（可能比 60 秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部內(nèi)容轉(zhuǎn)移到含有 10 ml 預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基 1 的試管中。

注意：在 37°C 的水浴中放置細(xì)胞過久會(huì)導(dǎo)致活性迅速喪失。

2. 立即以 300 x g 的速度離心細(xì)胞 5 分鐘，去除培養(yǎng)基并用 5 ml 預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基 1 重懸細(xì)胞。

3. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 T25 培養(yǎng)瓶中，并在 37°C 和 5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng) 24 小時(shí)后，檢查細(xì)胞附著和活性。更換培養(yǎng)基為新鮮的解凍培養(yǎng)基 1，并繼續(xù)在 37°C 和 5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好分裂。

5. 細(xì)胞應(yīng)在完全融合前進(jìn)行傳代。在第一次傳代和后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基 1G。

細(xì)胞傳代

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無 Ca2+/Mg2+ 的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用 0.05% 胰酶/EDTA 從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基 1G 并轉(zhuǎn)移到試管中。

3. 以 300 x g 的速度離心細(xì)胞 5 分鐘，去除培養(yǎng)基并用生長培養(yǎng)基 1G 重懸細(xì)胞。

4. 按照推薦的 1:6 至 1:8 的傳代比例，每周或每兩周將細(xì)胞種植到新的培養(yǎng)容器中。

細(xì)胞冷凍

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無 Ca2+/Mg2+ 的 PBS 沖洗細(xì)胞，并用 0.05% 胰酶/EDTA 從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基 1G 并計(jì)數(shù)細(xì)胞。

3. 以 300 x g 的速度離心細(xì)胞 5 分鐘，去除培養(yǎng)基并在 4°C 的細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸細(xì)胞，細(xì)胞濃度約為 2 x 10^6 個(gè)細(xì)胞/ml。

4. 將 1 ml 的細(xì)胞懸浮液分裝到每個(gè)冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在 -80°C 下過夜保存。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中長期保存。

注意：建議在早期傳代時(shí)擴(kuò)增細(xì)胞并至少冷凍 10 個(gè)小瓶以備將來使用。

圖 . GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 中 GIPR 的細(xì)胞表面表達(dá)。

GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 細(xì)胞（綠色）或?qū)φ?CRE Luciferase Reporter HEK293 細(xì)胞（藍(lán)色）用人類 GIPR PE 偶聯(lián)抗體（R&D Systems #FAB8210P）染色，并通過流式細(xì)胞儀分析。Y 軸代表細(xì)胞數(shù)量百分比。X 軸表示 PE 的強(qiáng)度。

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