GCGR/CRE熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞系是一種HEK293細(xì)胞系，表達由cAMP反應(yīng)元件（CRE）控制的螢火蟲熒光素酶，以及人類GCGR（胰高血糖素受體；NM_000160.5）。可以通過測量熒光素酶活性來監(jiān)測這些細(xì)胞中GCGR的激活。該細(xì)胞系已使用胰高血糖素和Retatrutide激動劑進行了功能性驗證。

圖1. GCGR/CRE熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞系用胰高血糖素處理時的作用機制示例。

胰高血糖素與GCGR結(jié)合，觸發(fā)腺苷酸環(huán)化酶的激活，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)cAMP增加。蛋白激酶A被激活，允許CRE啟動子的激活和熒光素酶的產(chǎn)生。因此，熒光素酶活性與GCGR與其激動劑的結(jié)合成正比。

背景

胰高血糖素受體（GCGR）屬于B1類G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR家族）。與GLP-1R（胰高血糖素樣肽1受體）和GIPR（胃抑制多肽受體）一起，它是調(diào)節(jié)葡萄糖穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵受體之一。GCGR的配體胰高血糖素通過GCGR和GLP-1R在胰島β細(xì)胞中增加胰島素分泌，盡管GLP-1R是主要的胰島素促進受體。此外，已經(jīng)顯示胰高血糖素增強嚙齒動物和人類的肝臟脂質(zhì)代謝并減少食物攝入。最近，三激素受體激動劑Retatrutide和幾種GLP1R/GCGR雙重激動劑的臨床結(jié)果令人鼓舞，表明GCGR可能是治療2型糖尿病和肥胖癥的一個有前景的共同刺激靶標(biāo)。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品GCGR/CRE 熒光素酶報告基因 HEK293 細(xì)胞系。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應(yīng)用

在細(xì)胞模型中篩選人類GCGR的激動劑

細(xì)胞解凍

1. 從液氮儲存中取出一個細(xì)胞小瓶。在準(zhǔn)備解凍前保持在干冰上。

2. 準(zhǔn)備解凍時，在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細(xì)胞的小瓶大約60秒。一旦細(xì)胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部內(nèi)容轉(zhuǎn)移到一個空的50毫升錐形管中。

注意：在37°C的水浴中放置細(xì)胞過久會導(dǎo)致活性迅速喪失。

3. 使用10毫升的血清學(xué)移液管，緩慢地向含有細(xì)胞的錐形管中加入10毫升預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基1。解凍培養(yǎng)基1應(yīng)滴加同時輕輕搖晃錐形管，以實現(xiàn)溫和混合并避免滲透沖擊。

4. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并用5毫升預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基1重懸細(xì)胞。

5. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶中，并在37°C和5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6. 培養(yǎng)24小時后，檢查細(xì)胞附著和活性。更換培養(yǎng)基為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并繼續(xù)在37°C和5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好分裂。

7. 細(xì)胞應(yīng)在完全融合前進行傳代。在第一次傳代和后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1G。

細(xì)胞傳代

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05%胰酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基1A并轉(zhuǎn)移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并用生長培養(yǎng)基1G重懸細(xì)胞。

4. 按照推薦的1:6至1:8的傳代比例，每周一次或兩次將細(xì)胞種植到新的培養(yǎng)容器中。

細(xì)胞冷凍

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細(xì)胞，并用0.05%胰酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基1G并計數(shù)細(xì)胞。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并在4°C的細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸細(xì)胞，細(xì)胞濃度約為2 x 10^6個細(xì)胞/毫升。

4. 將1毫升的細(xì)胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中長期保存。

注意：建議在早期傳代時擴增細(xì)胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。

圖2. GCGR/CRE熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞系對GCGR激動劑胰高血糖素和Retatrutide的劑量反應(yīng)曲線。

細(xì)胞用逐漸增加濃度的胰高血糖素（上圖）和Retatrutide（下圖）處理。使用ONE-Step?熒光素酶檢測系統(tǒng)測量發(fā)光。

相關(guān)產(chǎn)品：

Products Catalog # Size

GLP-1R/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 78176 2 vials

GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 78589 2 vials

CGRPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 78325 2 vials

GPRC5D CHO Cell Line 78337 2 vials

GPRC5D HEK293 Cell Line 78345 2 vials

GPRC5D (Cynomolgus) CHO Cell Line 78338 2 vials

GPRC5D (Cynomolgus) HEK293 Cell Line 78346 2 vials

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