CDH6 HEK293細胞系是一種穩(wěn)定表達人類CDH6（Cadherin-6/K-cadherin）蛋白（BC000019.2）的HEK293細胞系。該細胞系是通過脂質(zhì)介導的轉(zhuǎn)染，隨后使用潮霉素篩選和限制稀釋法生成的。通過流式細胞儀篩選單個克隆的CDH6表達水平，并選擇了一個高表達CDH6的克隆來生成這個細胞系。

背景

Cadherin-6/K-cadherin（CDH6）屬于細胞粘附分子的鈣粘蛋白超家族，是一種單次跨膜的類型1跨膜蛋白。在發(fā)育過程中，CDH6在神經(jīng)嵴形態(tài)發(fā)生中發(fā)揮作用，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)和腎臟的分化至關重要。CDH6在多種來源的腫瘤細胞中表達水平較高，包括甲狀腺、胃、卵巢和口腔鱗狀細胞癌。由于CDH6和其他鈣粘蛋白家族成員在癌癥進展的許多階段，包括腫瘤啟動、生長和轉(zhuǎn)移中的作用，它們是ADC（抗體藥物偶聯(lián)物）和CAR-T療法中具有前景的免疫治療靶標。

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應用

? 篩選針對CDH6的治療性抗體和ADC（抗體藥物偶聯(lián)物）。

? 共培養(yǎng)實驗篩選針對CDH6的CAR細胞。

細胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細胞的小瓶大約60秒。細胞一旦解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部內(nèi)容轉(zhuǎn)移到含有10毫升預溫的解凍培養(yǎng)基1的試管中。如果將細胞在37°C的水浴中放置過久，將導致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并用5毫升預溫的解凍培養(yǎng)基1重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉(zhuǎn)移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C和5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時后，檢查細胞附著和活性。更換培養(yǎng)基為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并繼續(xù)在37°C和5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在完全融合前進行傳代。在第一次傳代和后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1F。

細胞傳代

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05%胰酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養(yǎng)基1F并轉(zhuǎn)移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并用生長培養(yǎng)基1F重懸細胞。

4. 按照推薦的1:6至1:8的傳代比例，每周一次或兩次將細胞種植到新的培養(yǎng)容器中。

細胞冷凍

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞，并用0.05%胰酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養(yǎng)基1F并計數(shù)細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并在4°C的細胞冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞，細胞濃度約為2 x 10^6個細胞/毫升。

4. 將1毫升的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中保存。

注意：建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。

圖1：CDH6 HEK293細胞系中CDH6的表達。

對照親本HEK293細胞（藍色）或CDH6 HEK293細胞（綠色）用人類Cadherin-6/KCAD PE偶聯(lián)抗體（R&D Systems #FAB2715P）染色，并通過流式細胞儀分析。Y軸是細胞數(shù)量百分比。X軸是PE的強度。

文獻參考：

Bartolomé R., et al., 2021 Molecular Oncology. 15: 1849–1865.

Casal J., et al., 2019 Int. J. Mol. Sci. 20(13), 3373.

Pang L., et al., 2022 J Environ Pathol Toxicol Oncol. 41(1): 55-71.

Punovuori K., et al., 2021 Cell Mol Life Sci. 78(9): 4435-4450.

Suzuki H., et al., 2024 Mol Cancer Ther. 23 (3): 257–271.

Zhao Z., et al., 2021 Cancer Cell Int. 21: 493.

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