描述

TRα-GAL4熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞系是一種表達螢火蟲熒光素酶的HEK293細(xì)胞系，該熒光素酶受GAL4上游激活序列（UAS）的控制，同時穩(wěn)定表達與GAL4的DNA結(jié)合域（DBD）融合的人甲狀腺受體α配體結(jié)合域。該系統(tǒng)允許特異性檢測甲狀腺激素誘導(dǎo)的甲狀腺受體α的激活，與其他核受體的交叉反應(yīng)性低。該細(xì)胞系已通過三碘甲狀腺原氨酸（T-3）的刺激進行了驗證。

背景

甲狀腺激素對于調(diào)節(jié)身體的新陳代謝、整體生長和發(fā)育至關(guān)重要。這些激素通過核受體TRα和TRβ發(fā)揮作用，它們分別由THRA和THRB基因編碼。甲狀腺激素受體作為依賴配體的轉(zhuǎn)錄因子，通過與共激活因子、共抑制因子以及其他一般轉(zhuǎn)錄因子的相互作用來調(diào)節(jié)目標(biāo)基因的產(chǎn)生。TRα在人體中的表達不同，廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心臟、骨骼肌和消化道，而TRβ在肝臟、腎臟、垂體和下丘腦中表達。研究發(fā)現(xiàn)，THRA基因中的多種突變與對甲狀腺激素α的抵抗和組織特異性甲狀腺功能減退癥相關(guān)。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品TRα-GAL4 熒光素酶報告基因 HEK293 細(xì)胞系（甲狀腺激素受體α通路）。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

細(xì)胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃冷凍細(xì)胞瓶大約60秒。一旦細(xì)胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到含有10毫升預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基1的試管中。

注意：在37°C水浴中放置過久會導(dǎo)致細(xì)胞活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在5毫升預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基1中重懸細(xì)胞。

3. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C的5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時后，檢查細(xì)胞附著和活性。更換為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并在37°C的5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好傳代。

5. 細(xì)胞應(yīng)在完全融合前傳代。在第一次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1M。

細(xì)胞傳代

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基1M并轉(zhuǎn)移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在生長培養(yǎng)基1M中重懸細(xì)胞。

4. 按照推薦的次培養(yǎng)比例1:6至1:12，每周一次或兩次接種到新的培養(yǎng)容器中。

細(xì)胞冷凍

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細(xì)胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基1M并計數(shù)細(xì)胞。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在4°C的細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸細(xì)胞至約2 x 10^6細(xì)胞/毫升。

4. 將1毫升的細(xì)胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放置在保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中進行長期儲存。

注意：建議在早期傳代時擴增細(xì)胞并至少冷凍10瓶以備將來使用。

數(shù)據(jù)展示：

圖1.TRα-GAL4熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞系對T-3的劑量反應(yīng)曲線。

TRα-GAL4熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞在96孔板格式中用逐漸增加濃度的T-3處理。使用ONE-Step?熒光素酶檢測系統(tǒng)測量熒光素酶活性。結(jié)果表示為與未經(jīng)處理的細(xì)胞（未刺激對照）活性相比，熒光素酶報告基因表達的倍數(shù)誘導(dǎo)。

文獻參考：

Bochukova E., et al., 2012 New England Journal of Medicine 366(3): 243-249.

Moran C., et al., 2015 Best Pract Res Clin Endocrinol Metab 29(4):647-57.

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、新型冠狀病毒、CRISPR、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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