描述

重組HEK293細(xì)胞系，穩(wěn)定表達(dá)人類TNFR2基因（TNFRSF1B或CD120b，NM_001066.3），受CMV啟動(dòng)子控制。

背景

腫瘤壞死因子受體2（TNFR2，也稱為TNFRSF1B或CD120b）是TNF蛋白超家族的一種跨膜受體，能夠結(jié)合多效性的促炎細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）。TNFR2可以在幾種T細(xì)胞亞群中找到，如調(diào)節(jié)性CD8+ T細(xì)胞（Tregs）和CD4+腫瘤浸潤(rùn)性T細(xì)胞、髓系細(xì)胞和某些癌癥類型，它涉及自身免疫疾病、移植物抗宿主病和癌癥。TNFR2已成為癌癥免疫療法的一個(gè)有吸引力的靶點(diǎn)，其作為癌基因和免疫調(diào)節(jié)因子的不同功能正在被探索。TNFR2還表現(xiàn)出神經(jīng)保護(hù)特性，并促進(jìn)組織再生，使其成為治療阿爾茨海默病的有前景的潛在治療靶點(diǎn)。

作為BPS Bioscience在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品TNFR2 HEK293 細(xì)胞系。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應(yīng)用

? 篩選和表征TNFR2抗體。

? 在HEK293細(xì)胞中研究TNFR2信號(hào)傳導(dǎo)。

細(xì)胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃冷凍細(xì)胞瓶大約60秒。一旦細(xì)胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移到含有10毫升預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基1（不含普魯霉素）的試管中。在37°C水浴中放置過久會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在5毫升預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基1（不含普魯霉素）中重懸細(xì)胞。

3. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C的5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時(shí)后，檢查細(xì)胞附著和活性。更換為新鮮的解凍培養(yǎng)基1（不含普魯霉素），并在37°C的5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好傳代。

5. 細(xì)胞應(yīng)在完全融合前傳代。對(duì)于第一次傳代及后續(xù)傳代，使用生長(zhǎng)培養(yǎng)基1N（含普魯霉素）。

細(xì)胞傳代

1. 抽吸培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基1N并轉(zhuǎn)移到試管中。以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在生長(zhǎng)培養(yǎng)基1N（含普魯霉素）中重懸細(xì)胞。按照推薦的次培養(yǎng)比例范圍1:8至1:10，每周一次或兩次接種到新的培養(yǎng)容器中。

細(xì)胞冷凍

1. 抽吸培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基1N并計(jì)數(shù)細(xì)胞。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在4°C的冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸細(xì)胞至約2 x 10^6細(xì)胞/毫升。

4. 將1毫升的細(xì)胞懸浮液分裝到每個(gè)冷凍小瓶中。將小瓶放置在保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

數(shù)據(jù)展示：

圖1：TNFR2 HEK293細(xì)胞系中TNFR2的表達(dá)。

TNFR2 HEK293細(xì)胞（綠色）或?qū)φ沼H本HEK293細(xì)胞（藍(lán)色）用PE偶聯(lián)的抗TNFR2抗體（Biolegend #358404）染色，并通過流式細(xì)胞儀分析。Y軸是細(xì)胞數(shù)量百分比。X軸是PE的強(qiáng)度。

文獻(xiàn)參考：

1. Chen X, et al. (2017). Science Signaling, 10(462): 2328

2. Chopra M, et al. (2016) Exogenous TNFR2 activation protects from acute GvHD via host T reg cell

expansion. Journal of Experimental Medicine 213: 1881-1900

3. Medler J, et al. (2022) Tumor Necrosis Factor Receptor 2 (TNFR2): An Emerging Target in Cancer Therapy.

Cancers 14(11): 2603

4. Vanamee ?. and Faustman D. (2017). TNFR2: A Novel Target for Cancer Immunotherapy. Trends in

Molecular Medicine, 23(11): 1037-1046

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、新型冠狀病毒、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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