快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在 5~15 分鐘內(nèi)精確完成 DNA 切割的限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn)：5~15 分鐘內(nèi)即可完成酶切；共用一種酶切 Buffer，大大簡化酶切反應(yīng)體系；良好的酶活冗余度，輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切。

艾美捷快速內(nèi)切酶EagI：

Cat #: C-BSM535

Size: 25 rxns

Storage: -20°C

在推薦的反應(yīng)條件下，快速內(nèi)切酶EagI可在5~15分鐘內(nèi)消化單位底物。酶的極適反應(yīng)溫度為37°C。

當(dāng)?shù)孜顳NA被CpG甲基化酶甲基化時，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

該酶可以在80°C下孵育20分鐘進(jìn)行熱滅活。孵育3小時不會顯示星形活性，但孵育時間較長可能會導(dǎo)致星形活性。

使用方法：

1。快速DNA消化方案

①將下列反應(yīng)組分按所示順序在冰上混合：

a. 對于純化的PCR產(chǎn)物。如果PCR產(chǎn)物未純化，則應(yīng)將10倍CutOne“”緩沖液的量減少到2μl，以減少未純化PCR產(chǎn)物中的剩余金屬離子。如果用于克隆，我們建議在消化前純化PCR產(chǎn)物，因?yàn)橐恍〥NA聚合酶的核酸外切酶活性可能會改變切割DNA的末端。②輕輕攪拌并向下旋轉(zhuǎn)；③在37°C下培養(yǎng)15分鐘（質(zhì)粒DNA）或15～30分鐘（PCR產(chǎn)物）或30～60分鐘（基因組DNA）；

④ 可選：在80℃下加熱20分鐘使酶失活；

⑤ 如果在反應(yīng)中使用CutOne“”顏色緩沖液，則將反應(yīng)混合物的等分試樣直接加載在凝膠上。

2.DNA的雙重和多重消化

① 使用每種酶1μl，并適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)條件；

② 反應(yīng)混合物中酶的總體積不應(yīng)超過總反應(yīng)體積的1/10；③如果酶需要不同的反應(yīng)溫度，從需要較低溫度的酶開始，然后加入第二種酶并在較高溫度下孵育。

3.擴(kuò)大質(zhì)粒DNA消化反應(yīng)

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